雷帕霉素对低氧下HL-60细胞的低氧调控信号分子表达的影响

摘要目的：通过小分子化合物氯（CoCt2）模拟的低氧环境,分析低氧下及其雷帕霉素（RPM）作用下人急性髓细胞白血病细胞HL．60的低氧调控信号分子表达的变化;方法：常规方法复苏、传代、培养HL-60细胞,培养细胞进入对数生长期后用于实验。低氧模拟组、低氧雷帕霉素处理组、常氧雷帕霉素处理组分别用含2001xmol／LCoCl2、2001xmol／LCOCl2／20nmol／LRPM、20nmol／LRPM的1640培养基处理生长状态良好的细胞,对照组细胞用1640培养基培养,各组置培养箱以37℃、5％CO2培养,并于处理后24h、48h、72h收集细胞用于检测;采用实时荧光定量PCR方法检测低氧诱导因子（HIF-1α）、内皮细胞生长因于（VEGF）、雷帕霉素靶蛋白（mTOR）及GAPDH在转录水平的表达;结果：①与各时段对照组相比,低氧模拟组HIF-1α表达随时间逐渐增加,72h明显上调;与常氧雷帕霉素处理组各时段比较,低氧雷帕霉素处理组HIF-1α表达早期（24h）相对下调,后期相对上调;②．与对照组比较,各处理组mTOR表达均下调,低氧雷帕霉素处理组在早期（24h）下调显著;与常氧雷帕霉素处理组比较,低氧雷帕霉素处理组mTOR各时段的表达均相对下调;③与对照组各时段相比,低氧模拟组VEGF的表达在早期显著上调,但后期呈下调;常氧雷帕霉素处理组各时段VEGF的表达下调,与其比较,低氧雷帕霉素处理组各时段均呈相对下调。结论：常氧和低氧下RPM作用HL-60细胞后VEGF、mTOR的mRNA均表达下调,RPM可在低氧环境下增强了这种下调表达作用。     

雷帕霉素对低氧下人HL-60细胞增殖和凋亡的影响

本研究拟通过小分子化合物氯化钴（CoCl2）模拟的低氧环境,探讨雷帕霉素（RPM）对该低氧下人急性髓细胞白血病HL-60细胞的生物学行为的影响。低氧模拟组、低氧雷帕霉素处理组、常氧雷帕霉素处理组HL-60细胞分别采用CoCl2、CoCl2／RPM、RPM进行处理,对照组为常氧下常规培养的HL-60细胞,处理及培养24h、48h、72h后收集细胞,采用倒置相差显微镜观察细胞生长状况,常规瑞氏染色后光学显微镜下观察细胞形态;MTT比色法检测各组细胞的活性和增殖能力;AnnexinV—FITC／PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡。结果表明,与对照组细胞形态规则,胞核呈圆形或椭圆形相比,低氧模拟组和低氧雷帕霉素处理组细胞密度降低,生长明显受抑,细胞胞核呈不规则形或杆状,染色质粗糙,伴扭曲折叠等变化。各组间不同时问细胞增殖抑制率差异显著（P〈0．05）,低氧模拟组和低氧雷帕霉素处理组增殖抑制率随着处理时间延长而增大,且低氧雷帕霉素处理组的增殖抑制率大于低氧模拟组。与常氧下的对照组及雷帕霉素处理组比较,低氧的模拟组和雷帕霉素处理组诱导细胞发生较明显的凋亡,且后期72h低氧雷帕霉素处理组凋亡率显著高于模拟低氧处理组。以上结果表明,模拟低氧环境下,HL-60细胞生长明显受抑制,且诱导细胞凋亡;雷帕霉素可增强对低氧对细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。