HFJ和Wistar大鼠脂肪肝及胰岛素抵抗动物模型的比较

目的建立近交系HFJ大鼠和封闭群Wistar大鼠脂肪肝胰岛素抵抗动物模型及比较其生物学特性。方法雄性HFJ大鼠和Wistar大鼠,分别随机分为模型组和正常组,模型组喂养高脂饮食,正常组喂养普通饮食,两组脂肪分别占摄入能量的44.2%和19.2%,共饲养12周。每周称体质量,测定血糖、甘油三酯、胆固醇、ALT、AST、HDLC、LDLC和血胰岛素水平。实验期末处死动物摘取肝脏并称质量,计算肝指数;鼠肝脏用10%甲醛固定,石蜡包埋切片,HE染色,光镜下评估肝脂肪变性和炎症活动情况。结果镜下可见,HFJ和Wistar大鼠模型组肝细胞均呈现弥漫性脂肪变性,小叶内可见炎症细胞浸润,HFJ比Wistar脂肪变性较重,对照组肝脏均未见异常。两种动物的模型组ALT、AST、肝指数、HOMA-IR指数均显著高于其正常组,HFJ和Wistar种系间各指标的差异无显著性;HFJ大鼠模型组体重和正常组体重具有显著性差异(P<0.01),而Wistar大鼠模型组体重与正常组体重间无显著差异(P>0.05);HFJ大鼠TG和TC含量均显著高于Wistar大鼠。结论通过高脂饮食喂养成功建立了HFJ大鼠和Wistar大鼠脂肪肝与胰岛素抵抗疾病动物模型,与Wistar大鼠比较,HFJ大鼠具有自发性高血脂特征,造模更易成功,可为胰岛素抵抗和脂肪肝的发病机制研究、防治高血脂药物筛选提供一种新的实验动物。     

犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白Loop1、Loop2基因的克隆与表达

腺病毒主要的中和抗原表位位于六邻体蛋白Loop1、Loop2上,目前的研究主要集中在人腺病毒,犬传染性肝炎病毒（即犬腺病毒Ⅰ型）尚未见报道。本次研究参考Genebank发表的基因序列设计引物,提取ICHV基因组DNA,分别PCR扩增六邻体蛋白（Hexon）的Loop1、Loop2基因片段,用T4酶连接在一起,克隆入原核表达载体pET28a中,测序显示本室保存病毒分离株Loop1与CLL株、RI261株和TorontoA26/61株核苷酸序列同源性分别为100%、100%和83.8%;Loop2与CLL株、RI261株和TorontoA26/61株核苷酸序列同源性分别为88.1%、88.1%和99.3%,推导的氨基酸序列同源性分别为93.6%、93.6%和98.6%。转化BL21工程菌,实现了重组Loop蛋白在大肠杆菌中的高效表达,分子质量约为36kDa,并且利用镍柱纯化重组蛋白,纯度达95%以上。用重组蛋白免疫BALB/c小鼠后,以间接ELISA法测定血清抗病毒抗体效价达1：320以上,western blot鉴定免疫血清与ICHV特异性结合。本实验为建立新的犬传染性肝炎病毒基因工程产品奠定了良好的基础。     

链霉亲和素纯化和鉴定方法的研究*

对链霉亲和素进行纯化、鉴定,采用冷钝化的方法去除培养液中大部分杂蛋白,用亲和层析法从链霉菌L-183的培养液中纯化链霉亲和素(SA),经试验,SA回收率为75%~85%。鉴定表明,自制SA的分子量为74.5kD,每分子SA可结合3.2个生物素分子,活性为11.2U/mg,pI为7.4。自制SA各项生物学性质与文献报道相符。     

犬传染性肝炎DNA疫苗安全性评价

目的研究犬传染性肝炎核酸疫苗pVAX1-CpG-Loop的安全性。方法 BALB/c小鼠随机分为4组,高剂量组(肌内注射每只200μg)、低剂量组(肌内注射每只100μg)、联合免疫组(肌内注射每只100μg,皮下注射50μg,滴鼻每只50μg)和PBS组,每两周免疫1次,共免疫3次。末次免疫后4周、6个月检测血常规和血液生化及对F1代的影响,用PCR和RT-PCR的方法检测DNA疫苗的生物学分布和存留时间,末次免疫后4周和6个月取脏器观察病理损伤。结果各剂量组的主要血液学检测指标、对F1代的影响差异无显著性。末次免疫后4周各剂量组AST明显高于对照组。DNA疫苗在注射部位可存留8周,其中高剂量组和低剂量组在肝、脾、肾和注射部位有分布,联合免疫组在肺组织也有分布。末次免疫后4周小鼠肝肾有淋巴细胞浸润,6个月后慢性炎症明显好转。结论由犬传染性肝炎病毒DNA疫苗引起的肝肾损伤是一过性的,并且pVAX1-CpG-Loop没有整合到宿主基因组,也没有传递给F1代。     

犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白Loop1、Loop2基因的克隆与表达

犬传染性肝炎病毒（ICHV）主要的中和抗原表位位于六邻体蛋白Loop1、Loop2上。本次研究参考Genebank发表的基因序列设计引物,提取ICHV基因组DNA,,分别PCR扩增六邻体蛋白（Hexon）的Loop1、Loop2基因片段,用T4酶连接在一起,克隆入原核表达载体pET28a中,测序显示本室保存病毒分离株Loop1与CLL株、RI261株和Toronto A26/61株核苷酸序列同源性分别为100%、100%和83.8%;Loop2与CLL株、RI261株和Toronto A26/61株核苷酸序列同源性分别为88.1%、88.1%和99.3%,推导的氨基酸序列同源性分别为93.6%、93.6%和98.6%。转化BL21工程菌,实现了重组Loop蛋白在大肠杆菌中的高效表达,其表达的重组蛋白以包涵体形式存在,分子量约为36kDa,并且利用镍柱纯化重组蛋白,纯度达95%以上。本实验为建立新的犬传染性肝炎病毒基因工程产品奠定了良好的基础。     

近交系HFJ大鼠的抗肿瘤细胞Walker-256特性

目的检测近交系HFJ大鼠的肿瘤学特性。方法采用大鼠肿瘤细胞Walker-256分别接种HFJ大鼠和Wistar大鼠制作腹水瘤、实体瘤模型,观察两种动物对同一种肿瘤细胞的敏感性及免疫反应差异。结果对于腹水瘤Walker-256接种7d,Wistar大鼠有6只腹水产生为阴性,HFJ大鼠腹水产生均为阳性。继续观察至20d,可见到Wistar大鼠有3只腹水阴性(阳性率9/12,死亡2只,染色体用1只),而HFJ大鼠腹水全部为阴性(阳性率0/12,死亡2只,染色体用1只)。腹水中Walker-256细胞染色体分析,Wistar大鼠和HFJ大鼠众数变化范围均为50～62条,无显著差异。实体瘤接种7d,Wistar大鼠和HFJ大鼠均可触摸到右侧腋下有肿块产生。20d后Wistar大鼠除2只肿块消失外其他均有肿块存在并随时间延长而增大(阳性率13/15);所有HFJ大鼠腋下肿块均变软并逐渐消失(阳性率0/15)。检测各组大鼠的细胞免疫、体液免疫功能,发现正常HFJ大鼠IgM、IgA显著低于Wistar大鼠(P<0.01),IgG差异不显著。荷瘤组HFJ大鼠和Wistar大鼠IgG均高于各自正常对照组,差异极显著(P<0.01)。Wist-ar大鼠腹水瘤阳性组IgG显著低于阴性组和HFJ腹水阳性组(P<0.05),Wistar大鼠实体瘤阳性组也显著低于HFJ实体阳性组(P<0.01)。Wistar大鼠腹水瘤阳性组IgM显著低于阴性组(P<0.05),Wistar大鼠腹水瘤阴性组和HFJ大鼠腹水瘤、实体瘤阳性组IgM均高于各自对照组,且差异显著(P<0.05)。细胞免疫结果显示各组CD4+数量差异不显著;正常HFJ大鼠CD8+显著少于Wistar大鼠(P<0.05),Wistar大鼠腹水瘤和实体瘤阳性组CD8+数量较阴性组和正常对照组均显著减少(P<0.05)。各荷瘤阴性组大鼠CD8+数量均较正常值增加,除Wistar大鼠腹水瘤和HFJ实体瘤阴性组大鼠差异显著(P<0.05)外,其他均不显著;CD4+/CD8+结果与CD8+相反。结论 HFJ大鼠具有抗大鼠肿瘤细胞Walker-256的特性,腹水瘤及实体瘤均不易生长。     

链霉亲和素纯化和鉴定方法的研究

对链霉亲和素进行纯化、鉴定,采用冷钝化的方法去除培养液中大部分杂蛋白,用亲和层析法从链霉菌L-183的培养液中纯化链霉亲和素（SA）,经试验,SA回收率为75％～85％。鉴定表明,自制SA的分子量为74．5kD,每分子SA可结合3．2个生物素分子,活性为11．2U／mg,pI为7．4。自制SA各项生物学性质与文献报道相符。