柿SCoT-PCR体系优化及品种遗传多样性分析

选用国家柿种质资源圃中24个牛心柿和22个野柿为实验材料,采用L16(45)正交试验设计,建立了最优SCoT-PCR反应体系(20μL反应体系中,含Mg2+2.0mmol/L,dNTPs 0.2mmol/L,Taq聚合酶1.0U,引物0.5μmol/L,DNA模板80ng),并对不同引物的退火温度进行了优化,以探讨SCoT标记在柿亲缘关系鉴定和品种分类方面的应用。结果显示:(1)10条SCoT引物对46份材料共扩增出176个位点,其中多态性位点170个,多态率达96.6%;46份材料的遗传相似系数在0.619~0.852之间。(2)UPGMA聚类分析显示,SCoT标记能将46份材料完全区分开,其中:红花雄野毛柿、红花雌野毛柿单独被聚为一组,独立于牛心柿和野柿之外,与形态特征观察结果一致;璧山牛心柿与野柿聚为一组,在形态特征上璧山牛心柿也更趋于野柿,且璧山牛心柿为四倍体,与其他牛心柿(六倍体)不同,璧山牛心柿应属于野生柿。研究表明,SCoT标记是研究柿种质资源遗传多样性的有效手段;46份材料存在着较高的遗传多样性,在一定程度上反映了品种的地理分布情况,也说明地理因素对柿的亲缘关系有很大影响。     

单宁细胞形态与部分柿属种及品种相关性研究

采用软柿果肉直接压涂法,在光学显微镜下对204个柿属种及品种果实中的单宁细胞形态特征进行观察分析.结果显示:(1)在6个种柿属植物果实中,均含有单宁细胞,其外形大多属于短形和近圆形,但在数量、大小和颜色上存在差异,其中,油柿(Diospyros oleifera Cheng.)、君迁子(D.lotus Linn.)、柿(D.kaki Thunb.)、浙江柿(D.glaucifolia Metc.)的单宁细胞通常无色,而黑柿(D.nitida Mcrr.)为黄绿色,乌材(D.eriantha Champ.)为紫红色,乌柿(D.eathayensis Stheward.)为淡紫色;单宁细胞从大到小依次为油柿>君迁子>浙江柿>乌材>黑柿>乌柿.(2)单宁细胞在不同品种类型间差异明显,其中涩柿单宁细胞多为无色,单宁细胞比较宽大;甜柿品种均会出现褐变的单宁细胞,单宁细胞较小或瘦长;完全甜柿品种大多存在着凝固型褐变单宁细胞,仅少数凝聚呈球形,且单宁细胞分散存在于果肉中,果肉中的褐斑较细小;不完全甜柿在种子周围的褐斑处,可以看到大量的表面凹形且褐变的收缩型单宁细胞,且常以单宁细胞束的形态存在于果肉中,使果肉中的褐斑大而密;原产我国的完全甜柿中不存在凝聚型的单宁细胞,只有凝固型的单宁细胞.(3)聚类分析结果表明,单宁细胞的特征可以作为不同类型柿属种的分类依据.