同工酶技术及其优化

同工酶电泳法是一种常用的遗传多样性分析方法,具有成本低、耗时少和操作简单等优点。主要介绍了同工酶电泳法,过氧化物酶、酯酶和超氧化物歧化酶的染色技术,以及同工酶电泳的优化方法,以促进同工酶电泳分析技术在生物学、食品和制药等各领域的应用。     

悬浮培养CHO 细胞生产重组人促红细胞生成素条件的优化*

目的:通过对贴壁培养CHO细胞筛选驯化,得到高表达的细胞后进行悬浮培养生产重组人促红细胞生成素(rHuEPO)。方法:利用96孔板和24孔板对CHO细胞进行筛选,得到高表达细胞株后进行驯化,使其适合悬浮培养,经过摇瓶扩增后接种到生物反应器中无血清培养,每天监测葡萄糖含量,测rHuEPO表达量。结果:悬浮培养CHO细胞生产rHuEPO,生产周期短,表达量比贴壁培养高出很多,操作方便,减少污染,易于放大,并建立了适合悬浮培养的CHO细胞株,为工业化悬浮培养CHO细胞生产rHuEPO提供了技术基础。结论:经过工艺优化后利用无血清悬浮培养生产促红细胞生成素平均表达量较贴壁培养高,生产周期短,有利于降低生产成本。     

两种光合细菌生物转化槲寄生培养液菌体中几种同工酶的变化

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对两种光合细菌的生物转化槲寄生培养液中菌体的蛋白质和几种同工酶进行研究,并以纯光合细菌培养液中菌体作对照。结果表明,光合细菌生物转化槲寄生过程中,两种光合细菌的蛋白质、酯酶同工酶和过氧化物酶同工酶均发生改变,某些蛋白质、酯酶和过氧化物酶的合成受到抑制,并有新的蛋白质、酯酶和过氧化物酶生成;超氧化物歧化酶的表达未明显改变。由此可见,槲寄生能诱导光合细菌合成新的酯酶和过氧化物酶,这些诱导酶可能参与了槲寄生的生物转化。为光合细菌生物转化槲寄生转化机理的研究及槲寄生在抗肿瘤领域的进一步应用奠定了基础。     

基于遗传算法的光合细菌过氧化物酶电泳分析方法的建立

建立光合细菌中过氧化物酶的酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)分析方法。以电泳图谱的谱带数和灰度为指标, 运用正交试验和遗传算法对该方法的电泳条件进行优化。实验结果表明, 当凝胶中Triton X-100含量为0.31%、菌体破碎时间为19 min、样品中Triton X-100含量为0.79%时, 可获得清晰的沼泽红假单胞菌过氧化物酶图谱; 当凝胶中Triton X-100含量为0.27%、菌体破碎时间为16 min、样品中Triton X-100含量为0.76%时, 可获得清晰的球形红细菌过氧化物酶图谱。本方法为光合细菌中过氧化物酶的分析提供了一种新的、简单、快速的手段。     

过氧化物酶和PeroxiBase过氧化物酶数据库

过氧化物酶是存在于生物体中的一大类以过氧化物为电子受体催化底物氧化的酶,在生物体的生命活动中发挥着重要作用.过氧化物酶由多态性丰富的多基因家族所编码,其结构和功能具有多样性.近年来,随着研究和应用的深入,过氧化物酶领域迫切需要建立一个专业的信息交流平台.PeroxiBase数据库收集了大量的过氧化物酶数据,并进行生物信息学加工,为生命科学研究人员免费共享、最大化利用与综合开发过氧化物酶资源搭建了信息平台,在过氧化物酶的研究与应用中发挥着重要作用.