RAPD标记在韦塔桉种源遗传结构上的应用

采用适合韦塔桉RAPD分析的PCR扩增体系,对13个不同种源的韦塔桉运用20个不同随机引物进行了DNA序列多态性分析。实验结果表明韦塔桉不同种源间遗传多态性水平较高,共扩增出165个位点,其中多态位点占77.0%;13个种源间遗传分化指数值为0.5717-0.6670,遗传分化百分比值为0.090%-5.989%。根据遗传分化百分比值构建了13个种源之间的聚类图,聚类图显示了韦塔桉种源间的亲缘关系,17830、17831、17832、17833、17834、17835、17836、17837这7个种源相对聚在一起,17838种源与其它种源的相似性水平最低。对韦塔桉不同种源的RAPD研究为其种源的早期选择了科学依据。     

布渣叶糖基转移酶MpUGT1基因cDNA克隆及生物信息学和表达分析

UGT催化的糖基转移反应对合成黄酮苷类至关重要。为探究影响布渣叶黄酮苷生物合成的糖基转移酶,本研究参考布渣叶转录组数据,设计特异性引物,采用RT-PCR法对布渣叶中的UDP-葡萄糖基转移酶(UDP-glucosyltransferase, UGT)基因MpUGT1的编码区进行克隆,并通过在线服务器分析该基因的生物信息学特性;利用实时荧光定量PCR方法检测了MpUGT1基因在布渣叶的芽、叶、枝、果、花不同部位的表达情况。结果表明,本研究克隆得到的布渣叶MpUGT1基因,其cDNA全长为1 397 bp,ORF 1 377 bp,编码458个氨基酸,GenBank登陆号为KY652922。生物信息学预测分析该基因编码蛋白质分子式为C2324H3643N603O671S18,相对分子质量为51 kD,理论等电点(PI)为5.99,不稳定系数为43.81,亲水性系数为-0.105。该蛋白没有跨膜结构域,含有UDP-葡萄糖醛酸/UDP-葡萄糖基转移酶家族保守结构域,不含信号肽,定位于叶绿体。RT-qPCR组织特异性表达分析结果表明MpUGT1在芽、叶、枝、果、花中均有表达,且叶的表达量最高。系统进化树分析显示Mp UGT1与同科植物黄麻、长蒴黄麻等同源UGT的相似度最高,均达到了约80%;上述结果为进一步研究该基因在布渣叶黄酮苷生物合成中的作用奠定了基础。     

不同种源韦塔桉RAPD反应条件优化研究

对13个韦塔桉种源的RAPD反应条件,即PCR反应体系、PCR扩增条件等因素进行了研究。结果表明,最佳PCR体系为:DNA模板为10.0μL、双蒸水4.0μL、10×缓冲液2.0μL、25mMMgCl21.5μL、10mMdNTPs0.35μL、0.1μM引物2.0μ1、5UTaqDNA聚合酶0.15μL。最佳PCR扩增条件为:92℃预变性2min,1个循环;92℃变性1min,36℃退火1min,72℃延伸2min,共35个循环;72℃延伸5min,1个循环。