携带cip基因的酿酒酵母对自由生活线虫Panagrellus redivivus生长繁殖的影响

Photorhabdus luminescens细菌与昆虫病原异小杆属Heterorhabditis线虫专性共生。初生型共生细菌产生两种胞内晶体蛋白CipA and CipB,为共生线虫提供营养。为探索Cip蛋白是否对自由生活的全齿复活线虫Panagrellus redivivus具有类似的营养功能,建立了Cip蛋白的重组酿酒酵母表达体系,并用于饲喂无菌的P. redivivus线虫J1幼虫。重组酿酒酵母表达的Cip蛋白能为线虫所利用,表现为营养支持作用,体现为线虫生长发育速度的加快以及繁殖能力的提高,说明Cip蛋白能为此种自由生活线虫提供营养来源。     

昆虫病原斯氏线虫SY-5对重组Cip晶体蛋白的营养利用（英文稿）

【目的】初生型Photorhabdus luminescens细菌产生两种胞内晶体蛋白CipA和CipB,为其共生的昆虫病原异小杆线虫提供营养。探索非共生的斯氏线虫对Cip蛋白的营养利用情况。【方法】在已构建重组Cip蛋白大肠杆菌表达体系的基础上,建立重组菌细胞与无菌斯氏SY-5线虫共培养系统,检测线虫的生长发育情况。【结果】Cip蛋白对目标线虫生长有显著支持作用:发育为成虫的比例达到65%-82%,雌虫的怀卵率为80%-95%,平均怀卵量为30-50粒,并显著降低各虫态的死亡率。【结论】Cip蛋白不仅为共生的异小杆线虫提供营养,亦能为斯氏线虫所利用。     

昆虫病原线虫和共生细菌培养系统中噬菌体的检测

本文利用紫外照射、温度、pH、盐度诱导五株溶源性共生菌株Xenorhabdus和Photorhabdus,同时测定斯氏和异小杆属线虫Steinernema carpocapsae A24,S.carpocapsae AIL,S.feltiae English,S.feltiae SN,Heterorbabditis bacterophora H06在体外培养过程中是否存在感染共生细菌的噬菌体.结果未发现噬菌斑,说明实验菌株在实验诱导条件下以及昆虫病原线虫固体培养系统中不可能诱发噬菌体的危害.     

鹦哥岭海南五针松的种内和种间竞争

为了探讨海南五针松群落内物种间的竞争关系,该研究通过对海南鹦哥岭国家级自然保护区海南五针松群落内56株对象木及442株伴生种竞争木的调查,运用Hegyi的单木竞争模型分析其种内和种间竞争强度。结果表明:海南五针松的种内和种间竞争强度分别为31.31%和68.69%,说明竞争主要来自种间。海南五针松伴生种较多,种内与主要伴生种间的竞争关系为海南五针松线枝蒲桃海桐山矾五列木印度锥杏叶柯红鳞浦桃海南猴欢喜毛棉杜鹃浦桃木荷。竞争强度随海南五针松胸径的增大而减小,当海南五针松的胸径到达35 cm时,竞争强度变化很小,二者符合幂函数关系(CI=aD~b),所得模型能很好的预测海南五针松的种内和种间竞争强度。根据竞争模型预测,在海南五针松胸径达到35 cm之前,应对严重影响其生长的伴生种进行修枝或择伐,以保证其获得足够的生存资源,达到保护这一物种的目的。     

复方高支链氨基酸对肝硬化大鼠肝功能及营养状况的影响

将SD雄性大鼠用四氯化碳处理建立肝硬化大鼠模型,并随机分为A、B、C三组,A组大鼠给予静脉输注生理盐水,B组、C组大鼠分别给予输注等量的普通氨基酸注射液和复方高支链氨基酸注射液,分别于实验第0d、第14d测定大鼠体质量、肝功能指标及营养学指标水平。实验结束后,B、C两组大鼠体质量明显增加,与A组相比,B、C两组大鼠肝功能各指标水平显著降低,血清蛋白水平显著升高,且C组相比,B组大鼠肝功能水平与血清蛋白水平改善作用更为明显(p<0.05)。说明复方高支链氨基酸能改善肝硬化大鼠的肝功能指标,抑制血浆蛋白分解,有效控制肝硬化病症的进一步恶化。     

重组昆虫病原细菌Cip蛋白基因工程菌发酵条件的初步研究

昆虫病原细菌产生两种胞内晶体蛋白CipA和CipB,为新型的生物农药——昆虫病原线虫提供必需的营养。在已构建原核表达载体pET-15b-cipA和pET-15b-cipB的基础上,研究了这两种重组载体在不同宿主菌中的表达情况,重组菌的生长特性,摇瓶培养时表达重组Cip蛋白工程菌的发酵条件。结果显示:以E.coli BL21(DE3)为宿主菌,在LB培养基中培养至OD600为0.8～1.0时,1 mmol/L IPTG诱导8 h,CipA和CipB的表达量可达30.9%和32.6%,重组质粒具有良好的分离稳定性和结构稳定性。     

热稳定α-半乳糖苷酶基因在毕赤酵母中的分泌表达及酶学性质研究

克隆前期筛得分枝犁头霉Absidia ramosa WL511的热稳定α-半乳糖苷酶cDNA基因aga(GenBank No.DQ234280),将aga基因插入表达载体pPICZαA并电转化整合到毕赤酵母P.pastoris GS115的染色体上。30℃、甲醇流加量0.5%(V/V)时,酵母发酵上清液中酶活达32U/ml。纯化后酶的比活力为137U/mg,SDS-PAGE显示单一条带,凝胶过滤和SDS-PAGE估算其分子量分别为348kDa和87kDa,该酶为四聚体结构,糖基化导致重组蛋白的分子量比原酶大6kDa。该酶等电点为5.2,最适反应温度73℃,最适pH6.8,60℃以下及pH5.5～9.0范围内活性稳定。75℃时保温2小时保留54%的酶活,85℃时酶活完全消失。以对硝基苯酚-α-D-半乳糖苷为底物,该酶Km值为0.42mmol/Lol/L;Vmax为413U/mg;kcat为64531/min。     

昆虫病原线虫共生细菌胞内晶体蛋白的研究进展

初生型发光杆菌属(Photorhabdus)及嗜线虫致病杆菌属(Xenorhabdus)细菌分别与异小杆线虫属(Heterorhabditis)和斯氏线虫属(Steinernema)昆虫病原线虫互惠共生.这类昆虫病原细菌在稳定生长期分别产生两种形态各异的胞内晶体蛋白.本文回顾了这类蛋白的研究历史和最新的研究进展,特别是胞内晶体蛋白的理化性质和生物学功能,同时讨论这种晶体蛋白的研究方法与技术.