壶瓶枣干燥预处理及提取工艺对其多糖得率的影响

本文考察了不同的干燥预处理手段(烘箱干燥和真空冷冻干燥)及减压内部沸腾法中各因素(真空度、温度、液料比和提取时间等)对壶瓶枣多糖及蛋白质得率的影响。实验结果表明:干燥方式对原料枣粉的色差和多糖、蛋白质含量均有显著影响,对含水量无明显影响;真空冷冻干燥所得的枣粉色差小、多糖含量高、蛋白质含量低,综合考虑,选用真空冷冻干燥作为原料预处理手段;减压内部沸腾法最佳工艺参数为体系内温度60℃,液料比50∶1(mL∶g),提取时间30 min,此时外界温度为71℃,真空度为80 kPa,此条件下多糖及蛋白质得率分别为26.05 mg/g和2.14 mg/g;与传统热浸提相比,有效物质多糖得率提高了16.66%。     

一种快速鉴定猪肺炎支原体免疫显性蛋白抗原的ELISA方法的建立

旨在建立一种快速鉴定猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)血清体液免疫显性蛋白抗原的方法。通过构建p GEX-6P-1-mhp366重组表达质粒并转入大肠杆菌BL21(DE3),将GST-Mhp366重组蛋白进行原核表达。将GST-Mhp366重组菌和GST工程菌裂解液加入谷胱甘肽包被板进行抗原包被,分别与17份Mhp阳性血清和13份Mhp阴性血清反应,通过对抗原包被量、封闭液、血清和二抗稀释度的优化,确定间接ELISA的反应条件。最终确定GST-Mhp366重组菌和GST工程菌裂解液原液为抗原的最佳包被量,PBS+10%FBS+2.5%脱脂奶粉为最佳封闭液,分别将血清按照1∶500稀释、酶标二抗按照1∶40 000稀释作为最佳工作浓度,从而建立了一种基于间接ELISA的快速鉴定Mhp血清体液免疫显性蛋白抗原的方法,同时通过已知的血清体液免疫显性蛋白Mhp156和Mhp364对所建立的方法进行了验证。该方法的建立能够用于在基因组水平高通量筛选Mhp血清体液免疫显性蛋白抗原,并为Mhp初乳体液免疫和黏膜免疫显性蛋白抗原鉴定方法的建立奠定基础。