天然高分子复合人工肌腱组织细胞外基质的构建与表征

胶原与壳聚糖是2种具有较好生物相容性和一定力学强度的天然高分子,可在肌腱组织工程中用于细胞外基质的构建,但二者单独使用时各有不足.本研究利用二者性能上的互补,在一定的外力场作用下,采用EDC/NHS对2种天然高分子材料进行共价交联,获得具有一定空间取向和力学强度的多孔支架,然后引入细胞黏附因子RGD进行表面修饰,构建了具有较好组织相容性和细胞亲和性及适当降解速率的人工肌腱组织细胞外基质.对基质材料的力学性能、亲水性、体外降解速率等的检测和显微观察,结果显示:所构建的多孔支架材料柔软富有弹性,抗拉强度达:15.0Mpa,相应形变为:7.33%;孔隙率:79.4%;吸水率:772%;保水率:206%;在RPM1640培养液(含10%胎牛血清)和人血清中,3周总降解率分别为4.13%和37.2%,其降解速率可与肌腱修复周期相吻合,RGD修饰后材料对3T3-L1细胞具有较好的亲和性.有望成为理想的人工肌腱组织和人造皮肤细胞外基质,或整形手术的软组织填充材料.     

注射用重组人干扰素α2b冻干制剂稳定性试验

本文通过对三批注射用重组人干扰素α２ｂ（ｒＩＦＮ－α２ｂ）冻干制剂在不同温度下,保存不同时间取样,对其外观、生物学活性、ｐＨ值、溶解状态及无菌试验等各项理化指标的观察试验,结果本品的冻干制剂在－２０℃和４－８℃的条件下保存４２个月,其上述各项检定指标无明显变化,均符合质检规程,即本文制品在此条件下稳定性良好,有效期可定为三年。同时说明该产品的生产工艺稳定。     

假单胞菌减毒活疫苗免疫后的大黄鱼脾脏转录组分析

大黄鱼是中国东部沿海养殖的重要经济鱼类品种,多年来受到假单胞菌引起的内脏白点病的危害,疫苗免疫是预防该病的理想手段,减毒活疫苗(live attenuated vaccine,LAV)或DNA疫苗等能有效刺激宿主细胞免疫应答的疫苗可能是该菌疫苗发展的重要方向。为了评估减毒活疫苗的有效性,解悉大黄鱼对疫苗的免疫应答机制,本研究以重要毒力基因缺失的减毒活菌株ΔpcrV NB2011免疫鱼体,在免疫后0 h和48 h分别采取实验鱼的脾脏组织进行转录组测序。通过美吉云平台在线分析,一共注释了30 438条Unigene和70 618条转录本。筛选出上调和下调表达基因分别为311个和313个,其中免疫相关的显著性差异基因28个,涉及抗原加工呈递、补体系统、细胞因子、模式识别受体和吞噬作用,尤其是MHCI型抗原加工和递呈通路显著上调。对上调表达基因进行KEGG富集分析,涉及的最主要通路包括谷胱甘肽代谢通路、精氨酸-脯氨酸代谢通路、抗原提呈与加工通路和溶菌酶通路等。选取5个显著性差异表达的免疫相关基因进行qRT-PCR验证,验证结果与测序结果变化趋势基本一致,提示了LAV免疫后有效激发鱼体的细胞免疫应答,有助于快速清除胞内病原。本研究部分揭示了大黄鱼对致病性假单胞菌LAV的免疫应答机制,可以为疫苗的研制提供科学依据。     

肝旺痰阻型高血压大鼠模型的建立和评价研究

目的:建立和评价肝旺痰阻型高血压大鼠模型。方法:采用自发性高血压大鼠,以长期激怒联合高质饮食法建立肝旺痰阻的复合证候。通过观察大鼠性情动态的变化及体重、血压及血脂和血管紧张素Ⅱ的变化,对高血压大鼠肝旺痰阻证型进行综合评价。结果:模型组大鼠在性情动态及体重、血压、血脂和血管紧张素Ⅱ等方面均与对照组有较大差异(P<0.05),符合了中医肝旺痰阻证型的表现。结论:采用自发性高血压大鼠,以长期激怒联合高质饮食法,可建立肝旺痰阻型高血压大鼠动物模型。     

植物化学提取物对大肠癌作用及其机制的研究进展

大肠癌(colorectal cancer)是胃肠道疾病中常见的恶性肿瘤,其发病率及死亡率均较高。近年来,植物化学提取物指采用适当的溶剂或方法,以植物(整体或部分)为原料提取或加工后所获取的物质,作为肿瘤化学预防治疗的重要组成部分对大肠癌的作用已受到研究者们的广泛关注。研究发现,不同植物化学提取物包括植物多酚类、多肽类、生物碱、皂苷类、多糖类及维生素类等均具有抗大肠癌的作用,作用机制主要与抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡、阻断细胞周期、抑制肿瘤血管形成、诱导大肠癌细胞自噬、抑制大肠癌细胞迁移等途径密切相关。本文主要就大肠癌的发生机制、植物化学提取物的种类及其预防和治疗大肠癌的体内外最新研究进展进行了综述,旨在为大肠癌的临床防治提供更多的理论依据。     

构建可合成非天然辅酶的圆红冬孢酵母工程菌*

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)及其还原态是生物体通用的氧化还原辅酶和重要小分子,参与胞内众多代谢反应,因此调控NAD水平不仅难以选择性作用于代谢途径,还常常产生意外的生物学效应。最近研究发现利用非天然辅酶烟酰胺胞嘧啶二核苷酸(nicotinamide cytosine dinucleotide,NCD),可构建正交的氧化还原催化体系,为调控胞内代谢提供了新机遇。为实现在产油酵母圆红冬孢酵母中建立NCD介导的氧化还原代谢,采用农杆菌介导转化方法,在基因组整合表达密码子优化的NCD合酶(NcdS)编码基因NCDS,获得系列有效表达NcdS的工程菌株。酶偶联法分析发现,工程菌细胞裂解液NcdS酶活达8.1×10^-3 U/OD_{600 nm}。通过高效液相色谱法(HPLC)和超高分辨率质谱检测,确定细胞裂解液可催化合成NCD。在培养基内补加5.0 mmol/L烟酰胺核糖后,工程菌胞内合成NCD达41.6 μmol/L。对工程菌进行发酵和油脂提取,发现胞内表达NCD合酶未导致细胞产油性能降低,后续可通过表达其他NCD偏好性酶,有望在圆红冬孢酵母中建立受NCD调控的油脂合成代谢体系。