RNA干扰引起的非特异性免疫反应及其机制研究探讨

基因的表达失控是疾病发生的主要原因之一,干扰靶基因的表达可能成为有效的治疗手段。RNA干扰技术是近年兴起的基因调控干预方法,其基础,特别是应用研究极受关注,人们期待RNA干扰能成为肿瘤、病毒感染等难治疾病的临床治疗手段。然而,这一新兴技术在应用研究过程中显现出诸多问题,如细胞毒性、引起机体非特异性反应等等。就RNA干扰引起的非特异性免疫反应展开综述,探讨其机制,期望为RNA干扰的应用研究提供一些思考。     

次级淋巴组织趋化因子在肿瘤疫苗中的应用

次级淋巴组织趋化因子(secondary lymphoid tissue chemokine,SLC)是体内重要的CC亚族趋化成员,能趋化并活化免疫效应细胞,具有抗肿瘤免疫效应.利用SLC的生物学活性用于肿瘤疫苗的研究已取得较大进展,在肿瘤预防和治疗中具有广泛应用前景.该文介绍SLC基因修饰的瘸苗或树突状细胞(dentritic cell,DC),SLC联合协同细胞因子和共刺激分子的疫苗,SLC基因修饰的肿瘤抗原疫苗等的研究进展.     

大鼠gremlin1真核表达载体的构建及表达

构建大鼠gremlin1的真核表达载体pcDNA-gremlin,并观察其在真核细胞中的表达。从大鼠脑组织中提取mR-NA通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及巢式聚合酶链反应(nest-PCR)获得编码gremlin1的cDNA,定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中;经酶切和测序鉴定构建正确,应用脂质体法转染HSC-T6细胞,并通过蛋白免疫印迹法检测细胞内grem-lin1的表达。结果显示,构建了大鼠gremlin1的真核表达载体,转染HSC-T6细胞培养48 h后,收集并裂解转染细胞,蛋白免疫印迹法检测到转染HSC-T6细胞内gremlin1的表达显著增高。成功构建了真核表达载体pcDNA-gremlin,为研究gremlin在大鼠肝纤维化发生发展过程中的作用及作用机制奠定了基础。     

钙网蛋白及其与肿瘤的关系

钙网蛋白（calreticulin,CRT）是一种普遍存在且高度保守的内质网钙结合蛋白,具有调节钙平衡、协助蛋白质的折叠和加工、参与抗原提呈、血管发生及凋亡的调节等多种生物学功能。最近研究发现,CRT与肿瘤的发生发展、诊断、预后判断以及治疗密切相关。该文介绍钙网蛋白的结构、生物学功能及其与肿瘤的关系。     

SOCS超甲基化与肿瘤发生

细胞因子信号转导抑制分子(suppressor of cytokine signaling,SOCS)是一类在细胞信号转导过程中发挥重要作用的负调控因子,可抑制多种细胞因子的信号转导,从而实现对体内多种免疫反应的调控作用.近年来研究发现,SOCS启动子区域内CpG岛的超甲基化导致的基因转录沉默与多种肿瘤的发生密切相关.SOCS蛋白作为信号转导途径的负调节物,代表着一类肿瘤抑制基因,成为治疗肿瘤的新靶标.     

钙网蛋白与神经系统病变

钙网蛋白（calreticulin,CRT）是内质网中的一种多功能的分子伴侣,在协助蛋白质正确折叠和维持细胞Ca2＋稳态（Ca2＋信号）中发挥重要作用。近来的研究发现,钙网蛋白与神经系统病变包括阿尔茨海默氏病、帕金森病等有密切关系。     

浅析穿膜肽联合双螺旋RNA结合域技术递送siRNA入胞新策略

RNAi是真核生物中普遍存在的,能够剔除特定基因表达的监控机制,是传染性疾病及恶性肿瘤基因治疗的理想策略.然而,人体内各种生物膜形成的天然屏障的存在,使得siRNA进行临床应用的效率低下.近年来,研究者们发现了一类能够以高效无耗能方式穿过细胞膜进入细胞内的穿膜肽,它能够通过连接后易位的方式将结合上的siRNA递送入胞.但是,穿膜肽与siRNA结合时,会发生团聚、沉淀而限制其入胞效率.而RNA结合蛋白中存在的双螺旋RNA结合域,可在不改变siRNA结构基础上,结合并屏蔽siRNA的负电荷,协助穿膜肽更好地递送siRNA入胞,发挥特异的基因沉默作用.据此,建立了一种新的具有高效应用潜力的siRNA运输方式,为细胞免疫、基因治疗等临床研究提供一些参考.     

温度、血清以及肝素等因素对TAT穿膜效应的影响

目的:探讨在不同实验条件下,二甲基亚砜(DMSO)预处理培养细胞对TAT穿膜效率的影响.方法:体外培养Caski、4549、HepG2及COS7细胞株在不同实验条件下与荧光标记多肽TAT或无意义肽NCO共孵育.荧光显微镜观察TAT-FTTC的穿膜效率及其胞内定位;荧光酶标仪定量测定细胞内荧光强度.结果:10%DMSO预处理37℃和4℃下各细胞株后,TAT-FITC均可高效穿膜入胞,且胞浆、胞核巾均匀分布,胞核浓度高于胞浆;相同条件下未见NCO-FITC穿膜进入细胞.无血清组(Caski:1881±66、HepG2:2112±74、A549:2126±59)血清组较有血清组(Caski:1312±90、HepG2:1308±11、A549:1370±22)细胞内荧光强度大,且有显著差异(P<0.05).抑制剂Heparin存在时,Caski细胞荧光强度则明显减弱(加肝素组:1208±29,加肝素组:895±56;P<0.05).结论:10%DMSO预处理不同培养细胞在37℃和4℃条件下均可提高TAT的穿膜效率,血清和Heparin可减弱DMSO的穿膜增强效应.