大肠杆菌CusS的生物信息学分析及对银离子胁迫的响应

【目的】解析大肠杆菌(Escherichia coli) K-12菌株同型二聚体内膜传感器组氨酸激酶(sensor histidine kinase, CusS)蛋白在细菌应答金属银离子胁迫中的调控机制,为该菌的防治提供重要科学依据。【方法】利用ProtParam、ProtScale、Protein-Sol、TMHMM、SignalP、LocTree3、NetNGlyc-1.0、NetPhosBac-3.0、SOPMA、I-TASSERF、STRING和MEGA分别预测CusS的理化性质、亲水性、可溶性、跨膜域、信号肽、亚细胞定位、糖基化位点、磷酸化位点、二级结构、三级结构、蛋白互作的关系网络和蛋白在革兰阴性杆菌中的同源性。采用Red同源重组技术构建大肠杆菌ΔcusS,在不同培养基中连续监测ΔcusS的生长情况,观察该基因缺失后的细菌生长活性;通过最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)试验评价该缺失株对金属铜、银离子和临床常见抗生素的敏感性变化;运用RT-qPCR检测cusS缺失后其下游基因cusCFBA和cusR转录水平。【结果】CusS蛋白由480个氨基酸组成,相对分子质量为53 738.05,原子总数为7 624,等电点为6.02,具有稳定性,是一种亲水性、不溶性蛋白;含有跨膜域;不存在信号肽,定位于细胞内膜中;存在2个糖基化位点、24个丝氨酸磷酸化位点、14个苏氨酸磷酸化位点和3个酪氨酸磷酸化位点;二级结构中α-螺旋占比55.42%,β-折叠占比11.67%,β-转角占比3.75%,无规则卷曲占比29.17%;cusS在埃希菌属和志贺菌属中的保守性高;菌落PCR和一代测序验证ΔcusS构建成功;连续检测生长曲线表明cusS缺失并不影响细菌的生长代谢,但CusS蛋白为大肠杆菌抵御金属银胁迫的关键基因。【结论】cusS作为一个关键基因,它的缺失并不影响大肠杆菌的生长活性,但会显著降低细菌抵御银离子胁迫的应答能力。缺失cusS将使下游基因cusCFBA和cusR的mRNA表达水平显著下降。对CusS蛋白进行生物信息学分析及表型初探,为深入了解CusS在大肠杆菌应答银离子胁迫的调控机制奠定了基础。     

2例牛链球菌感染引起的肛周脓肿

牛链球菌是人类条件致病菌,主要感染免疫力低下人群和癌症患者。本文报道2例肛周脓肿患者,根据肛门口肿块切除后的脓液细菌培养确诊为牛链球菌感染。患者均有年龄轻、发病急、白蛋白偏低、白细胞计数高等特征,分析可能与患者的不良生活习惯及白蛋白偏低导致的免疫功能低下相关。本文着重分析其临床表现及相应的诊断方法,有助于提高临床医师对此类病例的认识与重视。     

浅析穿膜肽联合双螺旋RNA结合域技术递送siRNA入胞新策略

RNAi是真核生物中普遍存在的,能够剔除特定基因表达的监控机制,是传染性疾病及恶性肿瘤基因治疗的理想策略.然而,人体内各种生物膜形成的天然屏障的存在,使得siRNA进行临床应用的效率低下.近年来,研究者们发现了一类能够以高效无耗能方式穿过细胞膜进入细胞内的穿膜肽,它能够通过连接后易位的方式将结合上的siRNA递送入胞.但是,穿膜肽与siRNA结合时,会发生团聚、沉淀而限制其入胞效率.而RNA结合蛋白中存在的双螺旋RNA结合域,可在不改变siRNA结构基础上,结合并屏蔽siRNA的负电荷,协助穿膜肽更好地递送siRNA入胞,发挥特异的基因沉默作用.据此,建立了一种新的具有高效应用潜力的siRNA运输方式,为细胞免疫、基因治疗等临床研究提供一些参考.     

凸显创新能力培养的免疫学实验教学体系的探索

为提高医学免疫学实验教学质量,培养学生创新能力,对本校2015级、2016级及2017级5年制临床医学专业医学免疫学实验教学课程进行了改革和探索。在基础验证性实验的基础上,开展了综合设计性实验,并试行了探索性创新性实验及开放性科研性实验。通过改革使学生成为教学过程的主体,充分激发学生的学习热情,不仅培养了学生的动手能力,更提高了他们交流合作及分析和解决问题的能力,从而推进了学生创新能力的培养。     

SOCS超甲基化与肿瘤发生

细胞因子信号转导抑制分子(suppressor of cytokine signaling,SOCS)是一类在细胞信号转导过程中发挥重要作用的负调控因子,可抑制多种细胞因子的信号转导,从而实现对体内多种免疫反应的调控作用.近年来研究发现,SOCS启动子区域内CpG岛的超甲基化导致的基因转录沉默与多种肿瘤的发生密切相关.SOCS蛋白作为信号转导途径的负调节物,代表着一类肿瘤抑制基因,成为治疗肿瘤的新靶标.     

紫草素与依布硒啉对金黄色葡萄球菌的协同作用

【目的】探讨紫草素(shikonin,SKN)协同依布硒啉(ebselen,EbSe)抗金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus,S.aureus)的作用及机制。【方法】分光光度法测定紫草素-依布硒啉抗金黄色葡萄球菌活性;碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色检测紫草素-依布硒啉杀菌效果;透射电子显微镜观察紫草素-依布硒啉对金黄色葡萄球菌细胞形态的影响。通过荧光探针二氯荧光素二乙酸酯(2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate,H2DCFDA)检测紫草素-依布硒啉上调细菌胞内活性氧(reactive oxygenspecies,ROS)产量的能力;利用5,5′-二硫代双(2-硝基苯甲酸)[5,5′-dithiobis-(2-nitrobenzoic acid),DTNB]实验检测紫草素-依布硒啉对硫氧还蛋白还原酶(thioredoxinreductase,TrxR)活性的影响。通过加入还原剂二硫苏糖醇(DL-dithiothreitol,DTT)清除ROS进行挽救实验,复测相关指标,对上述结果进行验证。收集临床多...     

细胞穿膜肽入胞检测方法概述

迄今为止,已有多达上百种的细胞穿膜肽(cell-penetrating peptides,CPPs)被发现报道,但这类多肽分子的入胞能力参差不齐,限制了其作为药物载体的应用。虽然已有多种实验方法可用于细胞穿膜肽入胞的检测,但由于缺乏通用的技术来确切证实CPPs的入胞能力,所以应当结合使用多种方法以降低误差。对不同的技术在检测CPPs入胞时的优缺点进行比较,并针对性地提出比较理想的解决方案,可为制订CPPs入胞标准化检测步骤提供一些参考。     

TDRS与靶向性新型抗菌策略

硫醇相关的氧化还原系统(thiol-dependent redox system, TDRS)由硫氧还蛋白系统(thioredoxin system, Trx system)和谷胱甘肽系统(glutaredoxin system, GSH system)组成,存在于多种生物体内,共同维持细胞内氧化还原平衡。原核生物细胞Trx系统中的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase, TrxR)在结构和功能上与哺乳动物TrxR存在着天然差异。这些差异导致了细胞在相同药物作用下发生截然相反的氧化还原反应,使其可以成为潜在的抗菌作用靶点。此外,TrxR作为细菌看家基因trxB编码的蛋白,难以发生突变,故不易产生耐药性,是理想的新型抗菌靶标。本文就TDRS特别是Trx系统靶向性的新型抗菌策略作一综述。