二硝基氟苯修饰的黑色素瘤细胞激活树突状细胞诱导特异性T细胞反应

目的:探索半抗原二硝基氟苯(DNP)修饰的恶性黑色素瘤细胞(恶黑)激活树突状细胞(DC)后,在体外诱导特异性T细胞反应的抗肿瘤效应。方法:采用DNP修饰恶黑细胞M3(H-2d),然后在体外激活BALB/c小鼠(H-2d)外周血来源的DC,用于激发自体的T细胞,观察对T细胞的增殖和特异性T细胞的杀伤功能。结果:经DNP修饰的M3细胞激活的DC,其诱发的T细胞增殖能力和对M3细胞的特异性杀伤效应均明显高于未修饰的M3细胞组和DC组。结论:DNP修饰M3所激活的DC可以诱导更强的恶黑特异性T细胞效应。     

帕金森病患者血清klk6、HSP70检测的临床意义研究

摘要 目的：探讨帕金森病（PD）患者血清激肽释放酶6（klk6）、热休克蛋白70（HSP70）水平与病情严重程度以及PD轻度认知障碍（PD-MCI）的关系。方法：选择2021年2月至2022年2月徐州医科大学附属医院收治的165例PD患者（PD组），根据修订的Hoehn-Yahr分级将PD患者分为早期组（1.0~2.5级，59例）、中期组（3.0级，65例）和晚期组（4.0~5.0 级，41例），根据是否存在PD-MCI将PD患者分为PD-MCI组（66例）和非PD-MCI组（99例），另选择同期72例于我院门诊体检的健康志愿者为对照组。检测血清klk6、HSP70水平，比较不同分组血清klk6、HSP70水平差异，多因素Logistic回归分析影响PD患者发生PD-MCI的因素。结果：PD组血清klk6水平高于对照组（P＜0.05），HSP70水平低于对照组（P＜0.05），晚期组血清klk6水平高于早期组和中期组，且中期组血清klk6水平均高于早期组（P＜0.05），晚期组血清HSP70水平低于早期组和中期组，且中期组血清HSP70水平低于早期组（P＜0.05）；PD-MCI组血清klk6水平高于非PD-MCI组（P＜0.05），HSP70水平低于非PD-MCI组（P＜0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示年龄偏高、修订的Hoehn-Yahr分级晚期、高水平klk6是PD患者发生PD-MCI的危险因素（P＜0.05），高水平HSP70是PD患者发生PD-MCI的保护因素（P＜0.05）。结论：PD患者血清klk6水平增高，HSP70水平降低与修订的Hoehn- Yahr分级增加以及PD-MCI有关，检测血清klk6、HSP70水平有助于评估PD病情以及PD-MCI风险。     

腹腔镜胆囊切除术中Rouviere沟引导定位的临床应用价值

目的:研究Rouviere沟引导定位对腹腔镜胆囊切除术的应用价值。方法:选择2010年7月至2014年10月在我院进行胆囊切除术的患者300例,根据手术方式不同将患者分为研究组和对照组,每组各150例。研究组患者在Rouviere沟引导下行腹腔镜胆囊切除术,对照组采用传统定位手术。观察并比较两组手术时间、并发症及手术效果。结果:研究组患者Rouviere沟分型为开放型89例(59.33%)、融合型32例(21.33%)、缺失型29例(19.33%),分型的性别构成存在统计学意义(P0.05);与对照组比较,研究组手术时间较短、并发症少和中转开腹率低,差异有统计学意义(P0.05)。两组术后未出现任何病例胆管损伤和手术死亡,手术后恢复较好。结论:Rouviere沟引导定位行腹腔镜胆囊切除术的临床效果较好,值得临床进一步推广应用。     

人造血相关PBX相互作用蛋白的原核表达及纯化鉴定

目的:构建带His标签的人造血相关PBX相互作用蛋白(HPIP)的原核表达载体,获得His-HPIP融合蛋白,并对其生物学功能进行初步检测。方法:以本实验室保存的pcDNA3.0-HPIP质粒为模板,采用PCR技术扩增HPIP编码序列,将其插入载体p ET-28a(+)中,经Bam HⅠ和HindⅢ双酶切鉴定后转化大肠杆菌Rossate株进行小量诱导,挑选能诱导出His-HPIP的菌液进行融合蛋白的纯化,采用SDS-PAGE和Western印迹检测融合蛋白的纯化效果,采用GST pull-down技术对蛋白的生物学功能进行初步鉴定。结果:双酶切和测序结果表明His-HPIP原核表达质粒构建成功;His pull-down实验证实His-HPIP蛋白和雌激素受体α存在相互作用,说明生物学活性良好。结论:原核表达并纯化出His-HPIP融合蛋白,为进一步研究HPIP在肿瘤发生发展中的功能奠定了基础。     

基于cyt b基因的假眼小绿叶蝉11个地理种群遗传分化研究

应用特异性引物扩增假眼小绿叶蝉（Empoasca vitis G?the）56个不同地理种群Cytb基因片段,探讨了11个地理种群间的遗传多样性、分子变异、遗传分化程度及基因流水平,测序结果表明56条序列存在236个变异位点,45个单倍型。分析得出：（1）11个地理种群群体单倍型多样度 Hd 为0.978 79,群体的Hd范围为0.933 3~1.000 0,总群体和各种群的中性检验结果均不显著,其进化模型为中性模型。（2）总群体遗传分化系数 Gst 与固定系数 Fst 分别为0.017 03与0.165 47。种群间基因流Nm为1.26,较频繁基因交流减小了遗传差异,不存在明显的地理分化效应。     

调控DNA损伤修复基因的微小RNA

随着对DNA损伤修复基因研究的深入,其信号转导路径及调控网络也进一步明了,调控DNA损伤修复基因的微小RNA(miRNA)也越来越多地被认识和发现。简要综述了DNA损伤途径中调控主要的损伤修复基因的miRNA,有助于深入阐明DNA损伤修复机制,为开发抗辐射药物和临床上DNA损伤修复异常相关肿瘤的基因治疗提供新的靶点。     

核转录因子Foxp3在小鼠黑色素瘤细胞中的表达

目的:检测小鼠黑色素瘤细胞中核转录因子Foxp3的表达。方法:用TRIzol试剂提取小鼠黑色素瘤细胞RNA,通过实时荧光定量PCR检测小鼠黑色素瘤细胞中Foxp3 mRNA的表达,通过Western印迹和流式细胞术检测小鼠黑色素瘤细胞中Foxp3蛋白的表达,通过免疫荧光检测小鼠黑色素瘤细胞中Foxp3分子的表达。结果:在小鼠黑色素瘤细胞中存在Foxp3的mRNA转录和分子表达,免疫荧光显示Foxp3定位于黑色素瘤细胞的胞核及核周部位。结论:证实了小鼠黑色素瘤细胞表达Foxp3,将为临床黑色素瘤的免疫治疗提供新的靶标和治疗策略。     

带绿色荧光蛋白标签的人细胞分裂周期蛋白25同源蛋白的真核表达及其生物学功能研究

目的:构建带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标签的人细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(cdc25c)基因的真核表达载体pEGFP-cdc25c,并检测其在人胚肾293T细胞中的表达定位情况及生物学功能。方法:采用PCR技术从实验室已有质粒中扩增人cdc25c基因,并将其克隆到pEGFP-C1载体中;将重组质粒转染人胚肾293T细胞,Western印迹检测转染细胞的表达情况,荧光显微镜观察cdc25c蛋白在细胞中的定位,并利用cdc2 Tyr15位特异性抗体验证EGFP-cdc25c作为磷酸酯酶的生物学功能。结果:双酶切和测序鉴定表明,pEGFP-cdc25c真核表达质粒构建成功;转染293T细胞后获得表达,在荧光显微镜下,表达阳性的细胞呈绿色,并定位于细胞质;Western印迹结果表明,EGFP-cdc25c能增加cdc2 Tyr15位的磷酸化水平,起到拮抗内源性cdc25c的功能。结论:构建了带EGFP标签的人cdc25c基因真核表达载体,该载体能够在哺乳动物细胞293T中表达,表达产物定位于细胞质;EGFP-cdc25c能够发挥显性负性作用,为深入研究cdc25c的生物学功能奠定了重要基础。     

慢病毒介导RNA干扰HPIP蛋白抑制肿瘤细胞增殖

目的:建立高效稳定的造血相关的PBX相互作用蛋白质(HPIP)小干扰RNA(siRNA)细胞导入方法,检测HPIP的表达对肿瘤细胞生长增殖的影响。方法:构建人HPIP慢病毒siRNA干扰载体,将重组质粒转染人胚肾293T细胞,通过实时定量RT-PCR及Western印迹分析检测Lenti-H1 HPIP siRNA的干扰效果;将Lenti-H1 HPIPsiRNA与4个包装质粒共同转染293T细胞,包装成慢病毒后,感染宫颈癌HeLa和肝癌HepG2细胞,经嘌呤霉素筛选2周后,收集细胞进行Western印迹检测;用结晶紫实验检测其对肿瘤细胞生长增殖的影响。结果:构建的Lenti-H1 HPIP siRNA能有效抑制HPIP的表达;结晶紫实验显示,慢病毒介导的HPIP siRNA导致细胞增殖的显著抑制。结论:慢病毒介导的HPIP敲减能明显抑制肿瘤细胞的增殖,HPIP可能是一个潜在的肿瘤治疗新靶点。