CRISPR/Cas9介导的USP30基因敲除细胞系的建立及其对塞内卡病毒增殖的影响

【目的】利用规律成簇的间隔短回文重复序列/Cas9核酸酶（clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9 nuclease,CRISPR/Cas9）技术建立USP30基因敲除的人胚胎肾细胞（human embryonic kidney 293T cells,HEK-293T）细胞系,为开展宿主泛素特异性蛋白酶30（ubiquitin-specific protease 30,USP30）蛋白的功能研究建立了细胞模型;同时,初步探究USP30蛋白在病毒感染过程中的作用。【方法】根据Ensemble数据库查询USP30基因序列,定位USP30在基因组中不同转录本重叠区的第一个外显子段,设计并合成2对引导RNA （single guide RNAs,sgRNA）,分别构建在pX459载体中;将pX459-USP30-sgRNA质粒转染HEK-293T细胞,并用嘌呤霉素处理,筛选出转染阳性的细胞,然后通过有限稀释法筛选单克隆细胞,通过Western blotting及测序检测USP30基因的敲除。通过Western blotting及实时荧光定量PCR分析比较塞内卡病毒（Senecavirus A,SVA）在野生型和USP30基因敲除HEK-293T细胞中的复制差异。【结果】Western blotting及测序证实USP30基因敲除单克隆细胞系构建成功。进一步实验发现,SVA在USP30基因敲除细胞中的复制水平显著低于野生型细胞。【结论】成功构建USP30基因敲除的HEK-293T细胞系,首次证明USP30对SVA的复制具有促进作用,为进一步揭示USP30相关免疫反应和SVA感染过程的作用机制提供了良好的细胞模型,也为开展宿主USP30蛋白调控病毒复制的机制研究提供了关键工具和一定的理论依据。     

GnRH介导的GPCR信号转导系统在卵巢癌发生、发展中的作用

卵巢癌是最致命的妇科恶性肿瘤。虽然上皮性卵巢癌约占人类所有卵巢癌的90%,但该病的病因学了解甚少。促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)是下丘脑-垂体-性腺轴关键的调节器,主要调节脊椎动物的繁殖。研究发现,GnRH已经显示出对卵巢癌细胞有直接的抗增殖作用。GnRH受体是G蛋白偶联受体(G protein–coupled receptor,GPCR)家族的成员。本文主要就GnRH介导的GPCR信号系统与卵巢癌细胞的抗增殖作用之间的关系展开综述。     

CCN1与肝脏疾病的研究进展

CCN1即富半胱氨酸61(cysteine rich 61,Cyr61),是CCN家族成员之一,可与多种因子相互作用,是一种重要的细胞外基质调节因子。其与肝素及多种细胞整合素结合,在细胞黏附、迁移与增殖,以及血管生成、炎症反应和组织重构等生理、病理过程中发挥重要的调节作用。本文主要对CCN1与肝脏疾病的研究进展予以综述。分别对CCN1的结构和功能进行介绍,并进一步探讨了CCN1在肝损伤、肝纤维化、肝细胞癌的作用及可能机制,为研究和治疗肝病提供新思路。