ROS介导的蛋白质氧化的生化机制

活性氧（reactive oxygen species,ROS）介导蛋白质氧化的生化机制。ROS可以通过直接诱导蛋白质主链和侧链氧化,也可通过脂质过氧化和糖基化等过程间接诱导蛋白质氧化,从而导致蛋白质主链断裂、侧链β-切除、蛋白质羰基化以及蛋白质-蛋白质交联,最终导致机体生理和病理的改变,乃至加速衰老过程。该文介绍ROS介导蛋白质氧化的生化机制。     

衰老分子生物化学中的羰基应激

羰基应激(如：蛋白交联、醛一氨反应)是自由基和美拉德反应的共同结果,也是衰老的重要过程．尽管生物体本身有羰基降解酶和其它羰基解毒系统,然而,即使在健康组织中也还是有大量的有毒羰基化合物存在,特别是不饱和醛酮,如：马龙二醛、4．羟基壬烯醛等．这些不饱和醛酮在生理pH条件下就能与几乎所有的重要生物分子(如：蛋白质、核苷酸等)自发反应,导致一系列与衰老相关的变异．体内的不饱和醛酮还是谷胱甘肽下降、细胞膜损坏、酶功能抑制、免疫混乱、遗传变异、细胞复制受阻等病理变化的主要测定指标和重要原因;同时也是糖基化终产物、老年色素、眼球晶体白内障及胶原组织交联等老化现象的前体物质．因此,不饱和醛酮的毒害可能是机体衰老的核心过程．     

喜树碱-氟尿苷纳米颗粒对口腔鳞癌细胞Tca-8113增殖与迁移的影响

目的:探究喜树碱-氟尿苷(CPT-FUDR)纳米颗粒对口腔鳞癌Tca-8113细胞增殖与迁移的影响。方法:制备喜树碱-氟尿苷纳米颗粒,通过丁达尔现象证明已组装完毕。将制备好的纳米颗粒组和喜树碱(CPT)单药组、氟尿苷(FUDR)单药组以及两种单药混合组(CPT/FUDR)作对比,采用MTT实验检测药物对口腔鳞癌细胞Tca-8113增殖的抑制作用,通过划痕实验探究CPT-FUDR纳米颗粒和CPT/FUDR混合药物对细胞迁移能力的影响。结果:MTT结果显示:在药物浓度大于0.1μM时,随着浓度的增加,四组细胞存活率均明显下降(P0.05),而CPT-FUDR纳米颗粒组Tca-8113细胞的存活率明显低于单药CPT、FUDR和CPT/FUDR混合物组(P0.05)。在划痕实验中,培养48 h后,CPT/FUDR混合物组和CPT-FUDR纳米颗粒组均显著低于空白组(P0.05),且CPT-FUDR纳米颗粒组显著低于CPT/FUDR混合物组(P0.05)。结论:在体外,CPT-FUDR纳米颗粒对口腔鳞癌Tca-8113细胞的增殖与迁移有较好的抑制作用,且抑制效果优于CPT/FUDR两种单药混合。     

三个新2,2—二甲基苯并二氢吡喃类化合物的分离与鉴定

从中药三叉苦(Evodia lepta(Spreng.)Merr.)的地上部分分离鉴定了4个化合物。通过光谱解析和结构沟通的方法确定了它们的结构。其中3个为新化合物,依次命名为leptin A(Ⅰ)、leptin B(Ⅱ)和leptin C(Ⅲ)。另外一个已知化合物为异吴茱萸酮酚(Ⅳ)。     

菊叶薯蓣的快速繁殖研究

我国野生的薯蓣皂甙类植物由于盲目采集已日渐枯绝,甚至面临绝种的危险。原产于墨西哥的菊叶薯蓣不仅产量高、含薯蓣皂甙也高,因此在我国有很大的开发利用潜力。本文的工作是对菊叶薯蓣的外植体进行组织培养,筛选出了诱导芽和诱导根的优化培养基与培养条件,建立了无性快速繁殖培养系,获得了完整的培养植株并移栽成功。     

圈养马麝夏秋冬活动格局的比较

2000年6月至2001年1月间,在甘肃兴隆山保护区麝场对46只圈养马麝进行扫描取样观察,记录其站立及运动、摄食、反刍和静卧4种行为,并对各行为的发生率进行了统计分析。结果表明：圈养马麝的活动有昼夜节律和季节变化,夏季活动型属于晨昏型偏夜型,秋季偏向昼夜型,冬季也属昼夜型但趋于白昼活动;除季节间分布不一的晨昏活动高峰期外,3个季节均有相对恒定的午夜（22：00－01：30）活动高峰;气温是影响圈养马麝活动格局的主要因子。     

老年色素类荧光物质形成的生化机理

老年色素类荧光物质是人体基本生命过程中多种生化副反应的终产物,其中主要有与脂过氧化相关的通过不饱和羰基化合物与蛋白质交职而形成的荧光物质;有通过糖基化／美拉德反应而形成的糖基化终产物;有多聚烯起源的蓄存在视网膜色素上皮中的老年色素,另外,许多α-β-不饱和醛酮与核苷酸反应也能形成老年色素类生化聚合物,通过对老年色素形成的生化过程的研究发现,羰氨反应导致生物大分子的交联进而形成老年色素的过程是生物体内极为重要的与老化丰关的生物毒化过程。     

PXD101对口腔鳞癌HN-6细胞增殖及凋亡的初步研究

目的:本实验探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂PXD101对口腔鳞癌HN-6细胞的增殖、细胞凋亡及细胞周期的影响。方法:PXD101对口腔鳞癌HN-6细胞进行干预,倒置相差显微镜观察细胞形态学改变;MTT法检测PXD101对HN-6细胞的增殖影响;Annexin-V-FITC/PI双染流式细胞仪定量检测细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞周期。结果:PXD101可明显抑制HN-6细胞的生长(P0.05),呈时间剂量依赖性。倒置相差显微镜下观察对照组细胞贴壁,形态呈多边形,生长活跃;实验组细胞脱壁,变小,细胞核皱缩。绘制细胞生长曲线示,随着PXD101的浓度和作用时间的增加,HN-6细胞生长明显受到抑制,各实验组细胞生长抑制率与对照组比较,P0.05差别有统计学意义。1μmol/LPXD101作用24 h,48 h细胞总凋亡率分别为20.9%、38.6%,与对照组相比有统计学意义(P0.05);HN-6细胞周期阻滞于G0/G1期,与对照组相比,P0.05差别有统计学意义。结论:PXD101体外实验能显著抑制人口腔舌癌HN-6的细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

PA28γ及其胞浆定位突变体的构建及在肝癌细胞HepG2中的表达

目的：野生型PA28γ和核定位序列突变的PA28γ真核表达质粒并检测其在人肝癌细胞株HepG2中的表达,为进一步研究PA28γ的功能提供实验基础。方法：采用RT-PCR法从293T细胞中克隆得到PA28γ cDNA开放阅读框全长序列,并将该片段亚克隆到pMD-18T载体中,在该载体中利用定点突变获得核定位序列缺失的克隆。分别将野生型（WT）和突变型（MT）PA28γ克隆克隆到真核表达载体pDsRed1-C3中,脂质体法转染293T细胞确定两种克隆的细胞定位。再将野生型和突变型PA28γ分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)Flag中,构建好的真核表达质粒采用脂质体法转染人肝癌细胞株HepG2,经G418筛选、Western Blot鉴定后,获得分别高表达野生型PA28γWT和PA28γMT的HepG2细胞系。结果：双酶切及DNA测序结果表明,成功克隆和构建了含PA28γWT和PA28γMT的pDsRed1-C3和pcDNA3.1(-)Flag重组质粒;荧光显微镜观察证实在293T细胞中pDsRed1-C3/PA28γWT定位在胞核中而pDsRed1-C3/PA28γMT定位在胞浆中;Western Blot检测HepG2/ pcDNA3.1(-)Flag/PA28γWT和HepG2/ pcDNA3.1(-)Flag/PA28γMT,证实所筛选的HepG2细胞高表达相应目标蛋白。结论：成功构建了高表达野生型PA28γ和胞浆定位PA28γ的HepG2细胞系,为进一步研究人类PA28γ基因的功能奠定了基础。     

微波消融对骨肉瘤肺转移的影响

目的:探讨微波消融治疗骨肉瘤对其肺转移的影响及可能机制。方法:用含有1×10~7个大鼠源骨肉瘤UMR106细胞的悬液于SD大鼠右下肢皮下注射建立骨肉瘤移植模型,将其随机分为对照组和消融组。消融组大鼠肿瘤予以微波消融治疗10 min,50℃,空白对照组大鼠模拟消融10 min,0℃,检测和比较两组大鼠肿瘤直径变化,于治疗15天后处死大鼠,取大鼠肿瘤及肺组织,通过HE染色以及免疫组化检测基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMPs)及其拮抗因子(Tissue inhibitors metalloproteinase),即MMP-2、MMP-9及TIMP-2的表达。结果:消融组大鼠肿瘤直径明显小于对照组大鼠肿瘤直径,消融组大鼠肿瘤组织及肺组织MMP-2及MMP-9的阳性表达均显著高于对照组(P0.05),而TIPM-2的阳性表达则明显低于对照组(P0.05)。结论:微波消融技术治疗骨肉瘤可以抑制骨肉瘤细胞的增殖,甚至引起细胞凋亡,并且通过上调MMP-2、MMP-9以及下调TIMP-2的表达,可能会提高其远处转移发生的风险。