转译优化对EP0基因在cos7细胞中表达的影响

利用COS7细胞暂时表达系统,研究转译起始序列对EPO-cDNA表达的影响。通过DNA重组技术,构建了原EP0-cDNA表达载体pCSV-EP0(1)．其转译起始序列为5’AATTCATGG3’．同时通过定点突变技术,将起始序列改变成5’CCACCATGG3’,而构建了另一表达载体pCSv—EPO(2)。后者经序列分析证明无误后和前者均通过DEAE-dextran法转染COS7细胞,用ELlSA法定量洲量EP0表达水平．转染后48小时及72小时收集含pCSV—EP0(1)的COS7细胞上清．测定结果为1580pg／mI及954pg／mI,而含pCSV—EPO(2)的上清则为25 300pg／m1和17 450pg／ml。这表明经优化起始序列的基因表达远高于未经优化的。     

重组细胞株CHO-105C3无血清培养及人促红细胞生成素的表达

促红细胞生成素(EPO)是人体红系造血的特异性调节因子,它具有促进红系祖细胞生长、分化发育的功能。许多资料表明,肾脏是EPO的主要来源,严重肾功能紊乱患者,血浆中     

细胞信号蛋白的特征及胞内信号传递

细胞内部的信号传导是由一系列信号蛋白所介导的,这些信号蛋白按照一定的排列组合,通过瀑式反应将细胞信号逐级传递下去,人们在这些信号蛋白中发现了一些带有规律性的结构,如ＳＨ２、ＳＨ３、ＰＨ和ＰＴＢ结构区段,并认为这些特殊结构是信号蛋白在胸内排列组合的基本成份－“接头”,可以特异地与磷酸酪氨酸、聚脯氨酸等结构结合,从而构成胞内的信号途径与网络。     

丁酸钠对CHO-EPO工程细胞株rhEPO表达量的影响

以稳定整合有ｐＥＤＥＰＯ的ＣＨＯＥＰＯ工程细胞株为研究对象,在无血清条件下,系统观察了０５、１０、２５和５０ｍｍｏｌ／Ｌ４个浓度的丁酸钠作用于该细胞株的情况,结果表明：丁酸钠对ＣＨＯＥＰＯ工程细胞的生长有明显的抑制作用;影响ＣＨＯＥＰＯ工程细胞ＥＰＯ表达,浓度１０ｍｍｏｌ／Ｌ可提高ＥＰＯ表达量２５倍左右,并可持续较长的一段时间;延缓ＣＨＯＥＰＯ工程细胞在无血清培养时的细胞脱落;提高ＣＨＯＥＰＯ工程细胞ＥＰＯｍＲＮＡ水平     

S(yp) Y279和Y304介导了BcrAbl与Grb2等蛋白的结合

利用体外定点突变技术获得Ｓｙｐ Ｙ２７９Ｆ、Ｙ３０４Ｆ和Ｙ５４６Ｆ突变的ｃＤＮＡ, 将这些突变体和野生型Ｓｙｐ 分别构建入ｐＸＭ 真核表达载体, 转入Ｋ５６２ 细胞。经Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹证明, 各转染Ｋ５６２ 细胞中都有Ｓｙｐ 蛋白的表达。免疫沉淀与免疫印迹结果发现ＷＴ、Ｙ２７９Ｆ、Ｙ３０４Ｆ和Ｙ５４６Ｆ等４ 种Ｓｙｐ 在胞内均能直接与ＢｃｒＡｂｌ 结合。体外结合实验结果表明Ｙ３０４Ｆ突变导致了Ｓｙｐ 不能与Ｓｈｃ 结合,Ｙ２７９Ｆ突变则导致了Ｓｙｐ 不能与Ｇｒｂ２ 结合。结论是： 作为“接头蛋白”,Ｓｙｐ 可以介导ＢｃｒＡｂｌ 与Ｓｈｃ 和Ｇｒｂ２ 之间的结合;Ｇｒｂ２ 结合在Ｓｙｐ 的Ｙ２７９ 上,Ｓｈｃ 则结合在Ｓｙｐ的Ｙ３０４ 上     

伤寒-鼠伤寒重组株Vi4072在小鼠中定居及血清学效果观察试验

将编码Vi抗原的基因克隆到减毒的鼠伤寒沙门氏菌中组建的基因重组株Vi4072,以3×10~8CFU一次口服感染Balb/C小鼠,4天后按7,14,21,28,35,42,49,56,63,70天的间隔收集分离小鼠的集合淋巴结,肝,脾.鉴别是否有本菌出现,并检测血清和小肠匀浆液中的vi抗体.结果表明,感染后49天仍可从脾中分离到该菌;70天仍可从血清和小肠匀浆液中测出vi抗体。     

“细菌移位”还是“细菌易位”？

关于“Bacterial translocation”的研究虽已有几十年的历史,但是国内文献对将“Bacterial Translocation”翻译为“细菌移位”还是“细菌易位”还一直存在广泛争议。为对“Bacterial Translocation”的准确翻译提供理论依据,本文阐明了其研究背景及定义、发生机制及生物学意义;系统总结了国内文献中“细菌移位”和“细菌易位”的使用现状,从中文词义和生物学过程2个角度探讨了“Bacterial Translocation”对应的中文翻译;最终认定翻译为“细菌移位”更准确、认可度更高、更有利于推进相关研究的规范化。     

细菌“定植”还是“定殖”？

细菌定植/殖(Bacterial Colonization),是指来自不同环境的细菌接触到机体,并在特定部位黏附、生长和繁殖的现象。无论是共生菌对肠道的保护作用,还是致病菌引起的感染,往往都要依赖细菌定植/殖。目前,教材与期刊等对于"细菌定植"和"细菌定殖"这2个科技名词的使用不一,并存在两者混用的现象,尚未有明确的定论指出哪种使用正确。为了避免以上问题,并对"Bacterial Colonization"的正确翻译提供参考,本文对细菌定植/殖的条件和过程、意义、使用现状进行了分析与讨论,最终认为"细菌定殖"更适用于"Bacterial Colonization"的翻译。     

萤火虫荧光素酶基因cDNA真核表达载体在细菌中的高效表达

将荧火虫荧光素酶基因cDNA真核表达载体pGL2导入大肠杆菌HB101、鼠伤寒杆菌LB5000和X4064中,它在这些原核细胞中均有较好的表达效果。它在大肠杆菌HB101的表达量是该基因cDNA原核表达载体pUHF12-1的表达量的30倍。采用计算机PC／GENE程序包分析,pGL2的SV40早期启动子序列中含有SV40基因组HindⅢB片断中一段长为49bp的DNA序列,这一序列可能就是SV40基因组HindⅢB片断的原核增强子功能的决定序列,正是该序列使pGL2在细菌中获得了高效表达。     

Syp Y279和Y304介导了Bcr—Abl与Grb2等蛋白的结合

利用体外定点突变技术获得ＳｙｐＹ２７９Ｆ,Ｙ３０４Ｆ和Ｙ５４６Ｆ突变的ｃＤＮＡ,将这些突变体和野生型Ｓｙｐ分别构ｐＸＭ真核表达载体,转入Ｋ５６２细胞,经Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹证明,各转染Ｋ５６２细胞中都有Ｓｙｐ蛋白的表达。免疫沉淀与免疫印迹结果发现ＷＴ,Ｙ２７９Ｆ,Ｙ３０４Ｆ和Ｙ５４６Ｆ等４种Ｓｙｐ在胞内均能直接与Ｂｃｒ－Ａｂｌ结合,体外结合实验结果表明Ｙ３０４Ｆ突变导致了Ｓｙｐ不能与Ｓｈｃ结合,Ｔ２