冬凌草中一个苯丙醇酯新化合物

通过多种色谱手段,从冬凌草95％乙醇提取物中分离得到一个新化合物。运用多种波谱技术（1D、2D—NMR和MS）,该新化合物鉴定为2-氨基-3-苯丙基2-苯甲酰氨基-3-利胆醇酯（苯丙醇酯）。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对高脂饮食大鼠脂肪组织TNF-α表达的影响及意义

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对高脂饮食大鼠脂肪组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的影响及其与胰岛素敏感性的相关性.方法 将30只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常饮食组（ND组,n=10）和高脂饮食组（HFD组,n=20）.喂养16w,当两组大鼠体质量出现显著差异后（P〈0.05）,将HFD组按随机区组原则分为单纯高脂组（HFD组,n=10）和EGCG干预组（HFD＋0.32%EGCG,EGCG组,n=10）.干预16w.留取血清及附睾周脂肪组织.检测每组大鼠空腹血糖（FBG）、胰岛素水平（FINS）及游离脂肪酸（FFAs）,并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）;应用Real-time PCR及Western blot方法检测附睾周脂肪组织中TNF-α表达水平.结果 （1）与HFD组相比,EGCG组FINS水平显著下降[分别为（13.83±0.79）mIU/l vs.（31.71±3.61）mIU/l,P〈0.05];HOMA-IR值下降[分别为（3.36±0.31） vs.（7.59±0.99）,P〈0.05];FFAs值亦明显下降[分别为（0.38±0.08）mmol/l vs.（0.81±0.11）mmol/l,P〈0.05];三组大鼠FBG水平无明显统计学差异（P〉0.05）.（2）与ND组相比,HFD组脂肪组织中TNF-αmRNA水平显著升高[分别为（0.0033±0.00070）vs.（0.0010±0.00008）,P〈0.01];而EGCG组较HFD组则明显下降[分别为（0.0018±0.00037）vs.（0.0033±0.00070）,P〈0.05];同时,EGCG组TNF-α蛋白表达量低于HFD组[分别为（0.42±0.09）vs.（0.67±0.09）,P〈0.05];（3）EGCG组与ND组无明显差异（P〉0.05）.结论 EGCG改善高脂饮食大鼠胰岛素敏感性可能与减轻脂肪组织TNF-α介导的炎症状态相关.     

肥胖者脂肪组织中TNF-α表达与脂肪细胞大小的相关性分析

目的探讨肥胖者网膜脂肪和皮下脂肪两处肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白的表达与脂肪细胞大小的相关性。方法选取正常体重者16名,中心型肥胖者32名拟行外科手术患者,术中取出网膜脂肪和皮下脂肪标本,测定脂肪细胞大小,采用western blot方法测定TNF-α蛋白表达。结果肥胖者网膜脂肪和皮下脂肪两处TNF-α蛋白的水平均比正常体重对照组表达高(P<0.01),肥胖者网膜脂肪组织TNF-α蛋白表达高于皮下脂肪(P<0.05),同时研究发现肥胖者皮下脂肪细胞和网膜脂肪细胞大小均明显大于正常体重组(P<0.05),且肥胖者网膜脂肪和皮下脂肪两处脂肪组织TNF-α蛋白表达与脂肪细胞大小呈正相关(网膜:r=0.808,P<0.01;皮下:r=0.452,P<0.05)。结论肥胖者网膜脂肪和皮下脂肪细胞增大,在肥胖相关胰岛素抵抗的发生中起到了重要的作用。     

葡萄糖和肿瘤坏死因子-α对内皮细胞中早期生长反应基因-1表达的影响

目的探讨葡萄糖和肿瘤坏死因子-α对内皮细胞中早期生长反应基因-1表达的影响。方法利用人脐静脉内皮细胞体外培养,予以25mmol/L葡萄糖和/或10ng/ml肿瘤坏死因子-α与内皮细胞共同孵育,运用蛋白免疫印迹方法检测细胞中早期生长反应基因-1蛋白的表达,运用酶联免疫吸附法检测纤溶酶原激活抑制物-1的表达。结果葡萄糖和肿瘤坏死因子-α均可增加早期生长反应基因-1的表达,两种因素共同作用产生协同作用。而且,葡萄糖和肿瘤坏死因子-α也可促进纤溶酶原激活抑制物-1的表达。细胞外调节蛋白激酶1/2的抑制剂(PD98059)可下调肿瘤坏死因子-α所诱导的早期生长反应基因-1、纤溶酶原激活抑制物-1的表达,而对葡萄糖所诱导的早期生长反应基因-1的表达无明显影响。结论肿瘤坏死因子-α可能通过细胞外调节蛋白激酶1/2路径促进早期生长反应基因-1和纤溶酶原激活抑制物-1表达。肿瘤坏死因子-α和葡萄糖可能通过不同的信号通路调节早期生长反应基因-1、纤溶酶原激活抑制物-1表达,在肥胖、糖尿病等代谢紊乱所致的血管并发症的发生中起到重要的作用。     

麦没食子儿茶素没食子酸酯对TNF-α诱导的内皮细胞中PAI-1表达的影响及机制研究

目的探讨绿茶的主要成分麦没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在血管内皮细胞中对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)所诱导的纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)表达的影响及机制。方法利用人脐静脉内皮细胞体外培养方法,分别与TNF-α和/或EGCG孵育,运用蛋白免疫印迹方法检测内皮细胞中磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)和肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)蛋白表达,应用酶联免疫吸附法方法检测细胞液中PAI-1水平。结果 TNF-α以浓度依赖和时间依赖方式增加内皮细胞中PAI-1的表达。EGCG可抑制TNF-α所诱导的PAI-1的表达,并可抑制ERK1/2磷酸化。TNF-α的刺激可使TN-FR1表达明显减少,而EGCG可抑制这一作用。结论 EGCG可能通过抑制ERK1/2的磷酸化,从而抑制TNF-α所诱导的PAI-1的表达,同时可减少TNF-α对TNFR1的抑制作用,在改善肥胖、胰岛素抵抗及相关心血管疾病中起着重要作用。     

遗传性LCAT缺陷症与动脉粥样硬化

卵磷脂：胆固醇酰基转移酶（lecithin：cholesterol acyltransferase,LCAT）参与胆固醇酯的合成并在高密度脂蛋白（high density lipoprotein,HDL）的代谢中起重要作用。遗传性LCAT缺陷症是一种以低HDL-胆固醇（HDL-C）为特点的罕见遗传疾病。近年来,LCAT在HDL-C代谢中以及在动脉粥样硬化发生和发展中的作用逐渐被本领域研究者所关注。本文就LCAT缺陷症的遗传学和生化学特点做一综述,重点阐述为何尽管HDL-C水平明显减低,LCAT突变携带者却并未发生早期动脉粥样硬化。     

Dll4蛋白在高脂饮食喂养大鼠脂肪组织炎症中的作用

目的 探讨Delta-like ligand 4（Dll4）蛋白在高脂饮食喂养大鼠脂肪组织中的表达及其与脂肪组织炎症的关系.方法 将20只SPF级雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常饮食组（SD,n=10）和高脂饮食组（HFD,n=10）喂养16w后,应用免疫组化及Western blot方法检测脂肪组织中Dll4及炎症通路NF-κB磷酸化、IL-6的表达.结果 免疫组化结果显示,HFD组Dll4表达量显著升高（P〈0.001）;Western blot结果与免疫组化结果相一致,Dll4蛋白表达量是SD组的1.34倍（P〈0.01）;磷酸化核转录因子NF-κB表达水平升高,HFD组为SD组的2.03倍（P〈0.01）;HFD组炎症细胞因子IL-6水平明显升高,为SD组的3.02倍（P〈0.01）.结论 高脂饮食可增加脂肪组织中Dll4蛋白表达,促进了脂肪组织中炎症的发生.     

表没食子儿茶素没食子酸酯抑制肥胖大鼠肝中TLR4炎症通路及胰岛素抵抗

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对肥胖大鼠肝组织中Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)炎症通路以及胰岛素抵抗的影响。方法将30只雄性SD大鼠随机分为普食组(NC)和高脂饮食组(HFD)。喂养16周后,将高脂饮食组随机分为HFD组与EGCG组继续喂养16周,检测相关代谢指标,测定肝组织甘油三酯含量,并进行油红染色评估肝脂质聚集情况;实时荧光定量PCR检测其肝脏中TLR4和TNF受体相关因子6(TNF receptor associated factor 6,TRAF6)mRNA水平;蛋白质印记检测其肝组织中TLR4信号通路及胰岛素信号通路相关蛋白水平。结果EGCG明显降低大鼠肝脏甘油三酯浓度及脂质聚集、TLR4和TRAF6 mRNA水平,TLR4信号通路相关蛋白水平及胰岛素信号通路相关蛋白水平。结论EGCG抑制肥胖大鼠肝组织中TLR4通路以及胰岛素抵抗。     

表没食子儿茶素没食子酸酯可改善高脂饮食大鼠胰腺组织炎症状态

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate, EGCG)对高脂饮食大鼠胰腺组织炎症状态的作用及其与胰岛素抵抗的关系。方法将30只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常饮食组(the normal diet group as the control,NC组,n=10)和高脂饮食组(high-fat diet group,HFD组,n=20)。喂养16周,当两组大鼠体重出现显著差异后,将HFD组按随机区组原则分为单纯高脂组(high-fat diet group,HFD组,n=10)和EGCG干预组(HFD+0.32% EGCG,EGCG组,n=10);干预16周。留取血清及胰腺组织,检测每组大鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、胰岛素(fasting insulin,FINS)及游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs),并计算胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment-insulin resistance index,HOMA-IR);应用免疫组织化学方法检测胰岛中CD68^+巨噬细胞数目及TNF-α表达;应用Real-time RT-PCR及Western blot方法检测胰腺组织中CD68及Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TNF receptor-associated factor 6,TRAF6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白介素6(interleukin- 6,IL-6)等炎症相关因子表达水平。结果 HFD组大鼠体重、FFAs和FINS水平与HOMA-IR指数均明显升高,胰岛中巨噬细胞浸润明显增多,胰腺CD68水平及TLR4、TRAF6、TNF-α和IL-6等炎性因子表达明显上升;EGCG干预的HFD大鼠体重、FFAs和FINS水平、HOMA-IR指数、胰岛巨噬细胞浸润、胰腺CD68水平、胰腺TNF-α和IL-6表达的升高不如HFD大鼠明显,与NC大鼠接近;三组大鼠FBG水平无明显统计学差异;EGCG干预的HFD大鼠TLR4表达水平较HFD组未见明显下降。结论 EGCG可减少高脂饮食大鼠胰岛中巨噬细胞浸润,抑制炎症因子TNF-a及IL-6表达的上调,改善胰岛素敏感性;该作用并非通过TLR4信号通路实现。     

24株鸡源丁酸梭菌的分离鉴定及耐药基因与毒力基因携带情况

【目的】旨在对鸡源丁酸梭菌进行分离鉴定与安全性评估。【方法】利用厌氧培养方法对源自汶上芦花鸡与SPF鸡粪便样品进行丁酸梭菌的分离与纯化,挑选可疑菌落进行微生物质谱鉴定,进一步通过16S rRNA基因测序进行鉴定,16S rRNA测序结果与NCBI核苷酸数据库中丁酸梭菌的16S rRNA序列进行同源性分析;同时,进行所有分离株对氧氟沙星、头孢吡肟等9种药物的药敏试验,利用PCR方法进行mefA等23种耐药基因扩增,基于益生菌安全要求对样品进行alpha等4种梭菌毒素基因以及typeA等4种肉毒毒素基因的测定。【结果】共分离鉴定了24株丁酸梭菌。24株均对氧氟沙星等7种抗生素表现为敏感,L-1、L-6、L-12仅对新霉素表现为中介,L-19仅对头孢吡肟表现为中介。全部菌株的mefA等16种耐药基因结果全部为阴性,sul2、flor、blaTEM 3种耐药基因全部呈阳性,tetC携带率为79.2%,cmlA携带率为45.8%,blaOXA携带率为37.5%,aadB携带率为12.5%,qnrA携带率为4.2%。PCR结果显示所有分离菌株的alpha、beta、epsilon、iota等4种梭菌毒素基因携带率0%。全部分离菌株均未携带typeA、typeB、typeE、typeF 4种肉毒毒素基因。【结论】结果表明,从未饲喂抗生素和丁酸梭菌的汶上芦花鸡与SPF鸡群中获得的24株丁酸梭菌分离株达到预期的安全性要求,可作为益生添加菌的筛选参考株。