重组人类T淋巴细胞白血病病毒抗原及双抗原夹心法ELISA抗体诊断试剂盒的研制

为研制灵敏、特异的抗人类T淋巴细胞白血病病毒(HTLV)抗体诊断试剂,将一段HTLV-Ⅰ和HTLV-Ⅱenv区嵌合基因在大肠杆菌中表达,获得的重组抗原具有良好活性.将该抗原作为酶标记抗原建立双抗原夹心法ELISA(dsELISA),对31份HTLV-Ⅰ型血清和19份HTLV-Ⅱ型血清均能100%检出,而在5 065份各种阴性血清中特异度为99.94%.用dsELISA试剂与进口间接法试剂(GeneLabs试剂)平行检测18份HTLV-Ⅰ参比血清、17份HTLV-Ⅱ参比血清和1 024份献血员血清,结果dsELISA试剂正确率为100%,对HTLV-Ⅰ型血清和HTLV-Ⅱ型血清的反应性基本相同,平均s/co值显著高于GeneLabs试剂.而GeneLabs试剂对HTLV-Ⅱ型血清的反应性显著弱于Ⅰ型,并有2份BBI参比血清中的Ⅱ型血清漏检.另外,GeneLabs试剂在献血员血清中出现9例假阳性,特异性显著低于dsELISA试剂.这些结果表明:所研制的dsELISA试剂可用于HTLV-Ⅰ型和Ⅱ型血清的检测,其灵敏度和特异度均优于进口间接法诊断试剂.     

中国HTLV-Ⅰ env基因的克隆及Ⅰ＋Ⅱ型嵌合基因的原核表达与抗原活性检测

为尽快研制出国产HTLV抗体诊断试剂,首先从福建HTLV流行区1名HTLV感染者外周血细胞中克隆出HTLV-Ⅰ的全长膜基因（env）,继而结合文献报道、PSA1软件的新疏水性分析和EPI软件的B细胞表位分析数据,选择了gp46中段开始延伸至gp21N端212个氨基酸（aa185-aa396)的基因,并在3‘端通过（GlySer)2与人工合成的HTLV-Ⅱ型的型特异性表位区基因嵌合,插入原核表达载体pRSET,在E.coli中得到了高效表达目的蛋白产量约占菌体总蛋白的30％。通过Triton-X100洗涤,低湿度尿素逐步变性处理,8mol/L尿素溶解后纯度在75％左右,经电泳洗脱纯化,最终纯度可达95%短期,纯蛋白得率约为40％。经Western blottiong检测,该蛋白对4份HTLV-Ⅰ型和2份HTLV-Ⅱ型均有较强反应,而对4份阴性,血清无反应,从而可能用于研究HTLV抗体诊断试剂盒。     

福建沿海地区人T淋巴细胞白血病病毒1型膜基因的克隆和系统树分析

人Ｔ淋巴细胞白血病病毒１型（ＨＴＬＶ－１）是最早发现的一种ＲＮＡ肿瘤病毒。利用ＨＴＬＶ－１基因组长末重复区（ＬＴＲ）或膜基因（ｅｍｖ）序列进行系统树分析,可分为Ｃ、Ｊ、ＷＡ、ＣＡ和Ｍ５个亚型。为了解我国ＨＴＬＶ－１流行区毒株的主要基因型别,从福建莆田地区克隆出３株ＨＴＬＶ－１的ｅｎｖ基因。其序列与已知各亚型代表株进行系统树分析,结果表明均为Ｃ亚型。首次证实了中国大陆ＨＴＬＶ－１Ｃ亚型的存在。该地区