中国HTLV-Ⅰ env基因的克隆及Ⅰ＋Ⅱ型嵌合基因的原核表达与抗原活性检测

为尽快研制出国产HTLV抗体诊断试剂，首先从福建HTLV流行区1名HTLV感染者外周血细胞中克隆出HTLV-Ⅰ的全长膜基因（env），继而结合文献报道、PSA1软件的新疏水性分析和EPI软件的B细胞表位分析数据，选择了gp46中段开始延伸至gp21N端212个氨基酸（aa185-aa396)的基因，并在3‘端通过（GlySer)2与人工合成的HTLV-Ⅱ型的型特异性表位区基因嵌合，插入原核表达载体pRSET，在E.coli中得到了高效表达目的蛋白产量约占菌体总蛋白的30％。通过Triton-X100洗涤，低湿度尿素逐步变性处理，8mol/L尿素溶解后纯度在75％左右，经电泳洗脱纯化，最终纯度可达95%短期,纯蛋白得率约为40％。经Western blottiong检测，该蛋白对4份HTLV-Ⅰ型和2份HTLV-Ⅱ型均有较强反应，而对4份阴性,血清无反应，从而可能用于研究HTLV抗体诊断试剂盒。