大鼠甘氨肽酰化单氧酶在CHO细胞中的活性表达及在体外酰胺化修饰中的应用

将大鼠脑cDNA库来源的PAM基因片段,经克隆重组,构建成真核表达质粒pSV—PAM,并转染CH0细胞,获得在cHO中稳定表达活性型口α-酰胺化酶的细胞株DGAE。表达产物为双功能酶,分泌至培养基中的酶活力远高于胞内。体外酰胺化加工研究表明,以α—N—acetyl－Tyr-Val-Gly为底物,该酶催化反应的Km为12．Sμmol／L,V_max为180μmol／mg／h,而且催化反应中表现有最适铜离子浓度和pH值范围。表达的双功能酶可直接用于合成的多肽和基因工程表达产物的酰胺化加工修饰。     

蛋白质及多肽的C端分析

本文采用（异）硫氰酸化学法,以乙酸酐为活化试剂,四丁铵硫氰酸为偶联试剂,溴甲基萘为烷化试剂,将蛋白质或多肽的Ｃ端依次转化并裂解为ＡＴＨ－氨基酸,在２５４ｎｍ进行检测。分析了若干种天然的、基因工程表达的蛋白质或多肽,测定了不同长度的Ｃ端序列,并确证了Ｃ端的修饰及突变情况。为蛋白质和多肽的完整性、均一性,基因工程产品及合成多肽的质控提供了重要的Ｃ端信息。目前,可在１￣２ｎｍｏｌ水平上测定了３￣５个Ｃ端     

新型人白细胞介素－2突变点的分析鉴定

对新型人白细胞介素-2(IL－2－ser－125)进行了精制和纯度指标的鉴定。蛋白质N端序列分析表明产品中l／3部分N端缺失Met,这种微观不均一性在等电聚焦和毛细管电泳中有所反映。此外,对新型人IL－2的含点突变残基的多肽进行氨基酸序列分析,证实确由Cys－125突变成ser。     

乙肝病毒表面抗原Pre-S1的N端片段溶液构象研究

利用二维核磁方法对乙肝病毒表面抗原Pre S1N端 2 0～ 47肽段进行溶液构象研究 ,并用距离几何方法搭建分子结构 ,最后用分子动力学模拟方法对结构进行优化 .分析结果发现该肽段存在 4个 β turn ,位置与免疫学定义的抗原抗体结合位点相符 .     

血清胸腺因子(STF)的合成

本文报道了用液相法合成血清胸腺因子(STF)的结果。由于羧端L-天门冬酰胺羧基采用了对硝基苄基保护,每步均可方便地得到纯度和收率较高的中间肽结晶,最后经催化氢解温和地去除全部保护基获得有生物活性的STF纯品。     

一例β55Met·O血红蛋白的结构分析

将山东省招远市一慢电泳异常血红蛋白（ Ｈｂ）先证者血及正常人血分离纯化出珠蛋白,脲处理解链,再层析分离并纯化出正常及异常 β链．经胰蛋白酶水解,所得肽片段用 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ 分出酶解物中异常肽,此肽经氨基酸组成及顺序测定,表明它同于正常 β链的十九肽 β４１→５９;异常肽不被 Ｃ Ｎ Ｂｒ 作用,将它与正常十九肽通过质谱仪测定质荷比．结果说明异常肽的 β５５ Ｍ ｅｔ转变为亚砜型的 β５５ Ｍ ｅｔ· Ｏ,这转变是此异常 Ｈｂ 变异的一级结构基础．     

脊髓灰质炎病毒合成肽的免疫诱导作用

 本文报道了模拟脊髓灰质类Ⅰ型病毒Mahoney株外壳蛋白的氨基酸顺序,用化学方法合成了位于VP1 70～75、95～102、93～103、70～75+93～103和VP 3132～143的五段肽。合成的肽段与载体蛋白偶联后免疫家兎能产生明显的免疫记忆作用。结果表明这些合成肽均能被脊髓灰质炎多克隆抗血清所识别,具有一定的免疫原性。     

基因工程人γ干扰素C端的结构分析及功能作用

基因工程人γ干扰素经溴化氰裂解后进行HPLC分析,发现C端肽缺失。毛细管电泳?及氨基酸序列定量分析结果进一步指出,其C端不仅缺失,而且不均一,分别以Lys—125,Lys-128和Lys-13O为末端。用wIsH／VSV系统测定其抗病毒效价,比活性为3x10⁷Iu／mg,说明其C端缺失13-18个氨基酸残基时并不影响活性。本文还讨论了C端断裂的可能原因。     

Solution structure of N-terminal segment of hepatitis B virus surface antigen Pre-S1

ＨｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ(ＨＢＶ),ｔｈｅｍａｊｏｒｃａｕｓａｔｉｖｅａｇｅｎｔｏｆｃｈｒｏｎｉｃｖｉｒａｌｈｅｐａｔｉｔｉｓａｎｄｌｉｖｅｒｃｉｒｒｈｏｓｉｓ,ｉｓｓｔｒｏｎｇｌｙｃｏｎｎｅｃｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ.ＯｎｅｏｆｔｈｅｍｏｓｔｒｅｍａｒｋａｂｌｅｆｅａｔｕｒｅｓｏｆＨＢＶｉｎｆｅｃｔｉｏｎｉｓｔｈａｔｉｎｆｅｃｔｅｄｃｅｌｌｓｐｒｏｄｕｃｅｍｕｌｔｉｐｌｅｔｙｐｅｓｏｆｖｉｒｕｓｒｅｌａｔｅｄｐａｒｔｉｃｌｅ…