理化复合方法处理麻黄草种子的生物效应研究

初步研究了理化复合方法处理麻黄草种子的生物效应,研究结果表明采用矽力康复合肥处理麻黄草种子,对其生长起到了良好的促进作用.对于未进行低能离子注入的麻黄种子,矽力康复合肥处理种子后可使麻黄种子的盆栽出土率由7%提高到68%左右;采用8×1016 N+/cm2的剂量低能离子注入麻黄种子后,再使用矽力康复合肥进行理化复合处理,可使麻黄种子的盆栽出土率由14.7%提高到86.7%;使用矽力康复合肥的种子在3d、7d的呼吸速率分别由原来的0.903mg/g*h、0.430 mg/g*h提高至1.091 mg/ g*h、0.697 mg/g*h.比对照条件的呼吸速率增加20.8%～62.1%.     

颗粒溶素和穿孔素真核共表达及其对A549细胞的影响

目的：克隆人颗粒溶素和穿孔素基因并构建真核表达载体pGNLY-2A-PFP,观察其在人肺癌A549细胞中的表达情况。方法：体外分离培养外周血单个核细胞并抽提总RNA,RT-PCR扩增人颗粒溶素和穿孔素的基因片段,并将其分别插入pMD18-T进行测序,鉴定正确后构建pIRES-GNLY、pIRES-PFP及pGNLY-2A-PFP并转染人肺癌A549细胞,RT-PCR和间接免疫荧光检测目的蛋白表达,流式细胞Annexin V/PI检测转染后细胞凋亡情况。结果：成功获取了人颗粒溶素和穿孔素cDNA,构建了真核表达载体pIRES-GNLY、pIRES-PFP、pGNLY-2A-PFP,转染A549细胞后检测出了目的蛋白的表达,pGNLY-2A-PFP转染组细胞死亡率高于其他对照组（P<0.05）,死亡细胞以凋亡为主。结论：人颗粒溶素和穿孔素基因可以在人肺癌A549细胞中表达,二者共表达能够促进细胞凋亡,这将有助于颗粒溶素和穿孔素在肿瘤治疗中应用的后续研究。     

耐辐射奇球菌基因组DNA表达文库的构建与鉴定

目的:构建耐辐射奇球茵(Dcinoeoccus radiodurans R1)基因组DNA表达文库,为进一步研究耐辐射奇球茵高抗辐射的调控网络奠定基础.方法:提取耐辐射奇球菌基因组DNA,用Sau3AI酶将基因组DNA部分酶切成0.5-5 kb大小的片段,用T4DNA连接酶将部分酶切片段与经BamH I和碱性磷酸酶(CIAP)处理的pGADT7栽体进行连接后电击转化大肠杆菌DH5a.结果:得到重组子数为2.2×104,扩增后的文库滴度为108 cfu/mL.结论:构建了耐辐射奇球菌基因组pGADT7表达文库,为进一步筛选与高抗辐射相关基因产物的互作蛋白奠定了基础.