Protein engineering of insulin: Two novel fast-acting insulins [B16Ala]insulin and [B26Ala]insulin

Blood glucose lowering assay proved that [B16Ala]insulin and [B26Ala]insulin exhibit potency of acute blood glucose lowering in normal pigs, which demonstrates that they are fast- acting insulin. Single-chain precursor of [B16Ala]insulin and [B26Ala]insulin is [B16Ala]PIP and [B26Ala]PIP, respectively, which are suitable for gene expression. Secretory expression level of the precursors in methylotrophic yeast Pichia pastoris was quite high, 650 mg/L and 130 mg/L, respectively. In vivo biological assay showed that the two fast-acting insulins have full or nearly full biological activity. So both [B16Ala]insulin and [B26Ala]insulin can be well developed as fast-acting insulin for clinic use.     

生态系统服务价值在土地利用变化研究中的应用:瓶颈和展望

近些年,将生态系统服务价值运用于土地利用变化研究成为世界知名期刊上的重要话题,然而政策制定者在实践中却很少采纳这些研究成果.本文通过大量文献阅读,归纳出制约生态系统服务价值运用于土地管理实践的三大瓶颈,分别是价值测量的困难性、驱动因素的复合性和评价标准的片面性,并提出了相应的解决路径.最后,对我国未来的研究方向进行展望,认为基于生态系统服务价值对土地利用变化进行研究,更适合采用小尺度区域的比较分析方法,尤其应关注自然生态资源及其价值的过度性损失.     

胰岛素蛋白质工程: [B16Ala]胰岛素和[B26Ala]胰岛素——两个新型的速效人胰岛素

用大动物(猪)降血糖实验证明[B16Ala]胰岛素和[B26Ala]胰岛素是快速降血糖胰岛素. 它们的前体[B16Ala]PIP和[B26Ala]PIP, 在甲醇酵母体系中的分泌表达量分别为650和130 mg/L. 由于它们是新型的分别保留全部和几乎全部胰岛素体内生物活力的速效胰岛素, 且在甲醇酵母表达体系中得到比较高的表达量, 所以具有很好的临床应用前景.     

Vc二步发酵伴生菌巨大芽孢杆菌的选育

巨大芽孢杆菌经紫外线诱变,获得2株耐低pH、抗KGA的菌株：Bn,B5。在pH6.7～7．0的发酵培养基中与氧化葡萄糖酸杆菌发酵,Bn和B5的平均糖酸转化率分别提高3.5％,3．3％.在pH6．2的发酵培养基中,平均糖酸转化率提高11．4％,12．3％。在pH6．2和pH7．0含3％KGA的培养基中,2菌提前3～6h到达对数生长期,稳定期延长3～6h.经连续30代转接,特性稳定。     

巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）突变株Bn,B5的生物学特性及在Vc二步发酵中的伴生作用

对选出的巨大芽孢杆菌突变株Bn,B5进行了生物学特性及发酵条件的研究,发现它们具耐低pH和抗高浓2KGA特性.可促进氧化葡萄糖酸杆菌生长,使其延迟期缩短,产酸增加.适宜的通气量下,摇瓶糖酸转化率提高10%～14%;当发酵pH为6.2～6.6时,转化率提高20%～30%.     

高活性壳聚糖的制备及特性

壳聚糖经100kGy60Coγ-射线辐射处理后,在0.01g/L的浓度下,对金黄色葡萄球菌生长抑制作用增强100倍.辐照剂量增加或减少,壳聚糖的抑菌活性均随之大幅降低.经辐射处理后形成的壳聚糖片段分子量小于10万,对金黄色葡萄球菌无明显抑制作用.     

大鼠谷氨酰胺转运蛋白SNAT2-EGFP融合蛋白的表达与鉴定

谷氨酰胺转运蛋白是中枢神经系统中一种重要的中性氨基酸转运蛋白,对谷氨酰胺的跨膜转运十分重要。为了更方便地研究大鼠谷氨酰胺转运蛋白2(SNAT2)在细胞膜上的表达与定位,利用亚克隆技术将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)构建于SNAT2的C端,通过菌液PCR、酶切和DNA测序鉴定重组真核表达质粒;将测序正确的重组质粒瞬时转染人胚胎肾细胞(HEK293T cells),用Western blot和激光共聚焦电子显微镜荧光检测技术鉴定SNAT2-EGFP的表达与亚细胞定位。结果表明,SNAT2-EGFP融合蛋白重组质粒在细胞中表达并正确定位于细胞膜上。SNAT2-EGFP融合蛋白重组质粒的成功构建为今后深入研究SNAT2的结构和功能提供了一个有效的工具。     

混合培养中巨大芽孢杆菌对氧化葡萄糖酸杆菌的作用

为查明维生素Ｃ二步发酵混合培养中巨大芽孢杆菌与氧化葡萄糖酸杆菌间的关系,通过生长曲线测定、静息细胞实验及摇瓶发酵实验研究了巨大芽孢杆菌对氧化葡萄糖酸杆菌生长和产生２－酮基－Ｌ－古龙酸作用的影响;采用超滤分离、凝胶层析及聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对巨大芽孢杆菌胞外液中具有促进氧化葡萄糖酸杆菌产酸作用的活性物质进行了分离和纯化。结果表明,大菌胞内液和胞外液均可促进小菌生长,大菌胞外液中具有该作用的组分分子     

Vc二步发酵中Na^＋,Ca^＋＋及pH对巨大芽孢杆菌生长作用的影响

200mmol/LNa＋可导致对数生长期末期巨大芽孢杆菌的自溶,而这种自溶作用能被Ca＋＋抑制;在对数生长期后期,200mmol/LNa＋＋可使菌体提前到达稳定期;在衰亡期,200mmol/LNa＋能抑制菌体的衰亡。pH6.0可导致对数生长期末期菌体的自溶,pH6.0或pH6.4能明显的抑制衰亡期菌体的衰亡。     

Protein engineering of insulin: Two novel fast-acting insulins [B16Ala]insulin and [B26Ala]insulin

Insulin has been successfully used in clinic treatment of diabetes for more than 80 years. However, the clinic practice has shown that regular insulin preparation used in clinic exhibits several intrinsic problems that have existed for a long time. One of the major problems is that insulin has a potency of self-association when its concentration is higher than physiological concentration (10-8—10-10 mol/L)[1,2]. The concentration of the regular insulin is higher than 10-4 mol/L. At such a hi…