蝴蝶兰F3′5′H基因转化OT杂种百合Robina的研究

为了定向育种获得蓝色百合,该研究以百合Robina为蓝色基因最佳受体,以其花丝诱导产生的胚性愈伤组织和再生小植株小鳞片作为转化材料,利用农杆菌介导法,将蝴蝶兰F3′5′H基因导入百合Robina中。结果表明:以小鳞片为转化材料,预培养3d,OD_(600)为0.8,侵染10min,共培养3d,加入100μmol/L AS稳定转化率最高为12.78%;而以胚性愈伤为转化材料,预培养2d,OD_(600)为0.8,侵染10min,共培养3d,加入100μmol/L AS稳定转化率最高为12.22%。2种转化材料的最适潮霉素筛选浓度均为20mg/L。对抗性植株分别进行PCR和反转录PCR检测,获得9个阳性株系,Southern印记分析进一步确定了6株转基因百合中携带蓝色基因F3′5′H,为后续进一步获得蓝色百合奠定了基础。     

lncRNA XIST-miR137-ATG5调节细胞自噬功能在肠癌细胞5-氟胞嘧啶耐药性中的作用

摘要 目的：本文旨在研究长链非编码RNA XIST-miR137-ATG5的相互作用,同时探讨其调节细胞自噬功能与肠癌细胞5-氟胞嘧啶敏感性的关系。方法：实时聚合酶链反应(real time PCR)检测XIST与miR-137在肠癌细胞中的表达;采用脂质体转染法将si-XIST,miR-137转染入肠癌SW480及HCT116细胞中。采用CCK-8检测瞬时转染si-XIST对肠癌细胞增殖及5-FU敏感性的影响;并利用双荧光素酶报告实验检测miR-137与XIST, miR-137与ATG5相互关系。Western blot方法检测XIST- miR137- ATG5对细胞自噬的影响。结果：与正常结肠细胞FHC比较, XIST在结肠癌细胞系明显高表达,miR-137在结肠癌细胞系明显低表达。与阴性对照组比较,转染si-XIST后,SW480及HCT116细胞增殖能力明显受到抑制,对F-5U的敏感性增强,且抑制自噬蛋白Beclin-1及LC3II/LC3 I的表达。miR-137可与XIST,ATG5 3''UTR结合,抑制XIST和ATG5的表达及功能。在结肠癌SW480细胞中共转染miR-137 inhibitor或过表达ATG5可逆转XIST沉默引起的5-FU耐药,同时可逆转因XIST沉默引起的自噬蛋白表达的抑制。结论：LncRNA XIST或可通过调控mir137-ATG促进结直肠癌细胞SW480自噬从而提高其对5-FU的耐药,针对其这一机制,可为将来针对结肠癌的靶向治疗提供一定的实验基础。