植物细胞过氧化氢的测定方法

过氧化氢是重要的活性氧之一,激素等发育信号和胁迫刺激可以诱导细胞内H2O2的产生和积累,继而调控植物的气孔运动、生长发育、衰老和逆境应答等诸多生理过程。准确测定植物细胞内H2O2的含量及变化模式是系统研究H2O2信号转导及其生物学功能的一个关键技术。该文以拟南芥为实验材料,介绍了目前植物细胞H2O2的主要测定方法,包括激光共聚焦显微检测、紫外分光光度计检测和DAB组织染色,在此基础上比较分析了上述方法在灵敏度、检测范围、定量、成本以及耗时等方面的差异,为相关研究选择合适的H2O2检测技术提供参考。     

视频眼震检查在主诉非典型眩晕患者中的临床应用价值

目的:探讨视频眼震检查在主诉非典型眩晕患者中的临床应用价值。方法:分析118例主诉非典型眩晕患者的裸眼眼震、视频眼震,结合查体、已有的或者后续的双温试验、听力学检查以及影像学等临床资料,评估视频眼震检查的应用对前庭疾病临床诊断的意义。结果:主诉持续头昏沉感患者10例、飘飘感23例;低头、抬头、坐起、躺下、翻身等头部位置改变时不穏感50例;或者上述动作引起瞬间旋转感35例。以上患者均行自发性眼震检查和位置试验,裸眼下观察到眼震的患者有19例(19/118,16.1%),均得到临床诊断;视频下记录到眼震67例(67/118,56.8%),其中60例(60/118,50.8%)得出临床诊断。两种方法的眼震检出率比较差异有显著的统计学意义(P0.05),视频眼震检查的检出率显著高于裸眼下观察。结论:视频眼震检查所采用的眼罩有暗室诱发的效果,方便快捷,较裸眼观察,可显著地增加以下几种主诉非典型(转头时飘飘感,低头、抬头、坐起、躺下、翻身等头部位置改变时不穏感或者瞬间旋转感)眩晕患者眼震的临床诱发率,提供进一步的诊查方向,提高临床上对主诉非典型眩晕患者的诊断率。     

LEF-1的调控及其与肿瘤的关系研究进展

淋巴细胞增强因子（lymphoid enhancer factor,LEF-1）是Wnt信号通路中的一个重要调控因子。其异常表达对肿瘤细胞增殖和凋亡调控起关键作用。LEF-1作为Wnt信号通路核内的转录因子,还与T细胞受体α（TCRα）的增强子相互作用形成特定的构象,从而与其他因子结合共同调节基因的表达。同时,LEF-1为一多启动子基因,编码产生致瘤的全长形式的LEF-1和对Wnt信号通路起负向调控作用的截短形式的LEF-1。诸多研究结果表明肿瘤的发生发展与LEF／TCF各亚型的比例有关。就Wnt／LEF-1信号通路的调控以及与肿瘤的关系做一综述。     

重组人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor Kazal结构域的原核表达、纯化及活性鉴定

Hespintor是应用抑制消减杂交技术 (SSH) 从肝母细胞瘤细胞系HepG2中筛选得到的一未知功能蛋白,序列分析表明该蛋白属于Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子 (Serine proteinase inhibitor, Serpin) 家族中的一个分泌型新成员,具有与食管癌相关基因2 (Esophageal cancer related gene 2, ECRG2) 高度同源的Serpin基本结构。为了进一步阐明Hespintor的生物学功能,必须得到纯化的Hespintor蛋白。先将Hespintor Kazal结构域编码序列亚克隆至原核表达载体pET-40b(+),转化至Rosetta (DE3) 表达宿主菌中。经 0.25 mmol/L IPTG,30 ℃诱导5 h获得了分子量约为42 kDa的Hespintor-Kazal重组融合蛋白的优化表达,Western blotting证实了重组蛋白的特异性。Hespintor-Kazal重组融合蛋白以包涵体形式在宿主菌中表达,利用金属螯合亲和层析和阴离子交换层析柱对重组蛋白进行两步纯化。初步的活性鉴定表明,纯化的Hespintor-Kazal重组融合蛋白能特异性抑制胰蛋白酶的水解活性,提示Hespintor具有作为一种新型抗肿瘤药物的潜在开发价值。     

植物细胞过氧化氢的测定方法

过氧化氢是重要的活性氧之一, 激素等发育信号和胁迫刺激可以诱导细胞内H2O2的产生和积累, 继而调控植物的气孔运动、生长发育、衰老和逆境应答等诸多生理过程。准确测定植物细胞内H2O2的含量及变化模式是系统研究H2O2信号转导及其生物学功能的一个关键技术。该文以拟南芥为实验材料, 介绍了目前植物细胞H2O2的主要测定方法, 包括激光共聚焦显微检测、紫外分光光度计检测和DAB组织染色, 在此基础上比较分析了上述方法在灵敏度、检测范围、定量、成本以及耗时等方面的差异, 为相关研究选择合适的H2O2检测技术提供参考。     

小鼠B16黑色素瘤细胞核迁移蛋白基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

利用RT-PCR方法从小鼠B16黑色素瘤细胞中克隆了全长核迁移蛋白C(Nuclear distribution C,NUDC)基因,构建了该基因的毕赤酵母表达质粒pPICZaA-NUDC并在受体细胞Pichia pastoris GS115中获得表达,通过制备融合表达蛋白的多克隆抗体分析其对黑色素瘤细胞活性的影响.结果表明,克隆的NUDC基因全长1 000bp,含有完整的编码框,经SDS-PAGE和Western blotting分析表明,该基因相对分子质量约为45 kD.表达的蛋白能与兔抗NUDC抗体发生反应,制备的NUDC蛋白抗体可抑制黑色素瘤细胞生长.     

肠道菌群对1型糖尿病肠道通透性及免疫作用机制研究进展

1型糖尿病(Diabetes mellitus type1,T1DM)是一种青少年易发的胰岛β细胞被定向破坏引起的自身免疫性疾病,其发病机制可能与遗传、环境、免疫等因素有关。近年来研究发现,肠道菌群可能作为环境因素参与了T1DM的进程。在T1DM患者及动物模型肠道内存在菌群失调,肠道菌群可通过调节肠道通透性、固有免疫和适应性免疫等影响T1DM的疾病进程。综述了近年来国内外学者对肠道菌群与T1DM的发病机制关系的研究新进展,以期为T1DM的防治提供参考。     

不同有机无机复混肥对水稻产量和氮素利用率的影响

通过田间试验,研究了菜粕堆肥、猪粪堆肥和中药渣堆肥有机无机复混肥与化肥对常优1号水稻产量、氮素利用效率、土壤供氮特征以及土壤微生物多样性的影响.结果表明：各施氮肥处理的稻谷产量（7918.8～9449.2 kg·hm^-2）均显著高于对照（6947.9 kg·hm^-2）,其中有机无机复混肥处理的稻谷产量(8532.0～9449.2 kg·hm^-2)显著高于化肥处理（7918.8 kg·hm^-2）,比化肥处理增产7.7%～19.3%;菜粕堆肥、猪粪堆肥、中药渣堆肥有机无机复混肥处理的氮素积累量、氮素转运率、氮素回收率和氮肥农学利用效率及生理利用效率均显著高于化肥处理;有机无机复混肥处理明显提高了土壤矿质氮含量,改善了土壤供氮特性,提高了氮利用率;对各处理土壤DNA条带采用邻接法分析显示：5个处理土壤样品可分为三大族群,化肥与对照处理为第一族群,猪粪堆肥、中药渣堆肥处理为第二族群,菜粕堆肥处理属第三族群.表明施入外源有机物质(菜粕、猪粪与中药渣)可能会改变土壤的细菌群落结构,而施入化肥对土壤的细菌群落结构影响较小.     

特发性声门下狭窄临床诊治附4例报道

目的:探讨特发性声门下型喉狭窄的发病机制及临床诊治方法。方法:对我科2012年5月-2014年1月收治的4例特发性声门下型喉狭窄患者的临床资料进行回顾性研究,在基本相同的手术方式、不同的术后用药下进行长期随访,电子喉镜下观察患者术前、后及随访2年的病灶区情况并进行相关统计学分析。结果:4例特发性声门下型喉狭窄患者多因呼吸困难就诊,均采用气管切开术及支撑喉镜下热器械切除病变,旷置创面的手术方式,术后短期内气道狭窄均得到解决、呼吸困难症状均得到缓解;配合小剂量激素中长期治疗效果尚可,患者声门下病灶无明显复发,气道症状能得到控制,其中2例患者治愈,1例患者因拒绝激素治疗术后未予激素治疗中期观察有效,1例患者术中术后未予激素治疗,术后短期复发,后经激素治疗治愈。结论:特发性声门下型喉狭窄是后天性声门下狭窄的非瘢痕性的特殊类型,为独特的喉狭窄炎症性疾病,病因不明或为某些因素引起了非特异的增生性炎症,表现为炎性细胞的浸润及淋巴组织增生。治疗上,手术能明显缓解其症状,但单纯手术治疗中长期效果不佳,极易复发;配合中长期小剂量激素治疗对病灶控制有重要的作用。