乳腺癌中CELF6的表达水平及其与预后的关系

目的:研究CELF6在乳腺癌组织与正常组织中的表达差异以及其在乳腺癌中的预后意义。方法:采用GEPIA分析乳腺癌组织与正常乳腺组织中CELF6的表达差异,免疫组化检测乳腺癌组织CELF6蛋白的表达。KM-plotter在线分析TCGA数据库中CELF6的表达差异与乳腺癌患者生存预后的关系,CCK8实验分析不同CELF6表达水平对乳腺癌细胞生长增殖的影响。结果:GEPIA在线软件分析结果显示乳腺癌CELF6表达较与正常组织显著降低(P0.001)。免疫组化检测结果显示乳腺癌患者的乳腺癌组织CELF6的阳性表达显著低于癌旁的正常组织。KM-plotter在线分析的生存曲线显示CELF6高表达的乳腺癌患者生存预后显著优于低表达者(P0.001)。CCK8实验显示敲低乳腺癌细胞MDA-MB-231中CELF6的表达,细胞增殖速度显著变快,而过表达CELF6的MDA-MB-231细胞的增殖速度减慢。结论:CELF6可能作为潜在的抑癌基因,在乳腺癌组织中低表达,与乳腺癌患者预后不良有关。     

基于CRISPR/Cas9技术构建CELF6基因敲除细胞系并探讨CELF6与p53基因的关系

目的:构建CELF6基因敲除细胞系并探讨CELF6与p53基因之间的关系。方法:CRISPR/Cas9双载体慢病毒系统通过两个慢病毒载体分别向细胞中导入Cas9蛋白和sg RNA序列表达框,从而实现对CELF6基因的敲除。通过Surveyor(错配酶法)检测sg RNA活性并利用Western blot(蛋白质免疫印迹)检测CELF6的敲除效率。进一步利用CCK-8试剂盒检测敲除CELF6和过表达CELF6对细胞增殖的影响。利用公开可用的癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析CELF6在多种肿瘤组织中的表达情况。结果:CELF6基因敲除的HCT116细胞系成功构建。Western blot检测发现CELF6基因敲除的细胞系中p53、p-RB蛋白的表达水平显著下调,而CELF6过表达的细胞中p53、p-RB蛋白的表达水平明显上调。CCK-8实验结果显示敲除CELF6基因后,细胞增殖活性显著增强;而过表达CELF6后,细胞的增殖活性受到明显抑制。生物信息学分析发现CELF6在结肠癌、胶质母细胞瘤、子宫内膜癌、肾嫌色细胞癌、乳腺癌、甲状腺癌等肿瘤组织中显著低表达。结论:推测CELF6是一种新的潜在肿瘤抑制基因,其可能在肿瘤的发生、发展过程中发挥重要作用。     

利用培养组学技术分离鉴定体外降解胆固醇肠道细菌及其功能评价

高胆固醇是诱发心脑血管疾病的重要因素之一。目前国内外降低胆固醇的主要方式是药物治疗,但其存在费用高及副作用多的弊端。研究表明,肠道细菌对机体的胆固醇代谢有重要影响,但降胆固醇肠道细菌的筛选方式及功能评价却少有报道。本研究通过培养组学方法,使用牛胆汁酸或人工混合胆汁酸作为筛选条件,从健康人体肠道筛选出36种耐胆汁酸细菌。以鼠李糖乳杆菌GG株 (Lactobacillus rhamnosus GG,LGG) 作为阳性对照,设置0 g/L、0.3 g/L、3 g/L三种胆汁酸浓度组,对耐胆汁酸细菌进行体外降胆固醇能力评估,确定奇异变形菌、斯氏普罗威登斯菌、普通变形菌等10种细菌为降胆固醇优势菌。随后对其中6种降胆固醇优势菌——奇异变形菌、斯氏普罗威登斯菌、普通变形菌、潘氏变形菌、污蝇解克杆菌、雷氏普罗威登斯菌进行体外降甘油三酯能力评估以及人工胃液耐受能力评估。结果显示,上述6株细菌体外降甘油三酯能力均优于LGG。伴随人工胃液pH值的下降和作用时间的延长,6株细菌的生存率均下降。上述筛选实验及功能评价为进一步开发潜在的降胆固醇细菌制品提供研究基础。