一种检测转基因植物细胞中β-葡萄糖苷酸酶(GUS)活性的实用方法

APracticalMethodforDetectionofGUSActivityinTransgenicPlantCellsYinZhongchaoXuYaoYangFanLiBaojian(BiotechnolgyResearchCenter,ZhongshanUniversity,Guangzhou510275)β－葡萄糖苦酸酶（GUS）基因是近年来在植物基因工程研究中应用得最为广泛的报告基因之一’‘’．其产物GUS活性的检测有多种方法,其中最常用的是组织化学染色法和荣光分析法．但前者为定性检测而且如操作不慎很容易产生假阳性,而后者虽可精确定量测定仅需要相应的配套仪器。我们采用的这种方法是首先将植物细胞粗提蛋白在非变性聚丙烯酚胺凝胶中进行…     

利用根癌农杆菌法获得转基因水稻植株及其后代

在100μmol／L乙酰丁香酮（AS）等vir基因诱导分子存在的情况下,用含双元载体pBYT2的根癌农杆菌菌株EHA101同水稻（OrizasativaL．）台北309悬浮培养细胞共培养3天。经过2个月的连续筛选,共从364颗同根癌农杆菌共培养的悬浮培养细胞团中得到17个具有稳定潮霉素抗性和GUS表达的愈伤组织。对从8个转化组织中得到的10株可能的R0代转基因植株及其后代进行外源基因的整合和表达分析,Southern分析表明外源基因已稳定地整合进水稻基因组中并实现了有性遗传传递。杂交结果显示在其中一个转化系的植株中有5个拷贝的T－DNA整合,而其余的转化系则只整合了1个拷贝。转基因水稻细胞及植株中GUS活性的组织化学染色观察和荧光分析表明玉米ubiquitin基因启动子在水稻细胞中能高效启动gus报告基因的表达。ndPAGE－X－Gluc法检测表明转基因水稻细胞中表达的GUS蛋白比Sigma公司的标准GUS蛋白（SigmaCo．G0786）要小,而与来自大肠杆菌HB101（pBI1121）中的GUS蛋白大小相同。结果表明,根癌农杆菌可有效且可靠地介导外源基因转化水稻。