甜菜黑色焦枯病毒外壳蛋白与病毒致病性的关系

利用RT-PCR方法,构建获得了由T7RNA聚合酶启动子驱动的甜菜黑色焦枯病毒(BBSV)全长cDNA克隆pUBF52.摩擦接种苋色藜(Chenopodiumamaranticolor)后,体外转录产物可导致与野生病毒相同的枯斑症状,蛋白质印迹和RNA印迹检测也都证明了转录产物的侵染活性.构建了BBSVp24基因的原核表达载体pECP1,转化大肠杆菌BL21后的诱导表达产物能够与BBSV的抗血清呈现特异性反应,表明该基因编码产生BBSV的外壳蛋白(CP).以pUBF52为模板,分别构建了BBSVCP基因的移码突变体和不同程度的缺失突变体.侵染性检测表明,CP基因的移码突变对BBSV在苋色藜上所导致的枯斑症状及病毒RNA在寄主体内的积累基本没有影响,但CP基因的大部或完全缺失会使体内病毒RNA的积累水平大大降低,其中CP基因完全缺失的突变体转录物接种苋色藜后仅能够产生很轻的枯斑症状.将绿色荧光蛋白(GFP)基因和葡糖苷酸酶(GUS)基因分别与BBSVCP基因的5′端融合,构建了表达载体pBGFP和pBGUS.摩擦接种苋色藜叶片后可观察到GFP或GUS基因的表达,为探索利用BBSV作为外源蛋白的表达载体奠定了基础.     

小麦黄花叶病毒基因组核苷酸序列分析*1)

以小麦黄花叶病毒(WYMV)HC分离物为材料,合成病毒基因组cDNA并进行序列分析.结果表明,病毒RNA1共有7 629个核苷酸,编码1种由2 407个氨基酸组成的多聚蛋白,切割产生病毒外壳和其他7种可能的蛋白质.该病毒的RNA2共有3 639个核苷酸,编码1种由903个氨基酸组成的蛋白,可能切割产生2种非结构蛋白.WYMV虽然与小麦梭条花叶病毒(WSSMV)在基因组结构上具有相似性,但是两者间在核苷酸及氨基酸水平上的同源性却分别低于70%和75%.由此结果可以确认,WYMV与WSSMV是大麦黄花叶病毒属(Bymovirus)的2种不同病毒.     

利用原生质体融合研究凤尾菇中性菌株的交配反应

凤尾菇营养缺陷型突变型中性菌株与另一株营养缺陷型的正常交配型菌株进行了原生质体融合反应.融合子之间以及与亲本之间在菌落形态和菌丝生长速度上表现出了较大差异。融合子菌落角变的菌丝体从多核体转变为双核体,并且在菌丝体上产生了圆桶状的特殊结构而不是通常的锁状联合。初步观察表明这些结构似乎与细胞核的迁移有关.对融合子子实体的担孢子进行了遗传分析,结果确证子实体是由两个亲本菌株的融合子产生,同时也表明要对中性菌株交配反应中基因重组进行深入分析还需要进行更多的研究。     

小麦黄花叶病毒基因组核苷酸序列分析

以小麦黄花叶病毒 (WYMV)HC分离物为材料 ,合成病毒基因组cDNA并进行序列分析 .结果表明 ,病毒RNA1共有 76 2 9个核苷酸 ,编码 1种由 2 40 7个氨基酸组成的多聚蛋白 ,切割产生病毒外壳和其他 7种可能的蛋白质 .该病毒的RNA2共有 36 39个核苷酸 ,编码 1种由 90 3个氨基酸组成的蛋白 ,可能切割产生 2种非结构蛋白 .WYMV虽然与小麦梭条花叶病毒 (WSSMV)在基因组结构上具有相似性 ,但是两者间在核苷酸及氨基酸水平上的同源性却分别低于 70 %和 75 % .由此结果可以确认 ,WYMV与WSSMV是大麦黄花叶病毒属 (Bymovirus)的 2种不同病毒 .     

一种中国发生的真菌传小麦花叶病毒RNA－13＇末端核苷酸序列分析

以采自河南的真菌传小麦花叶病毒（ＦＷＭＶ－Ｃ）为材料,抽提病毒ＲＮＡ,合成互补ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）。对杂交筛选所得ｃＤＮＡ克隆进行亚克隆及序列分析,结果表明,亚克隆ｐＧＳＩ含有一个长度为８９１个核苷酸的不完整开放阅读框架（ＯＲＦ）和长度为２５８个核苷酸的３＇末端非编码区（ＮＴＲ）,并带有Ｐｏｌｙ（Ａ）尾序。此段序列与大麦黄花叶病毒（ＢａＹＭＶ）及法国报道的一种小麦梭条花叶病毒（ＷＳＳＭＶ－Ｆ）的ＲＮＡ－１３＇末端分别具有６７．６％和６９．９％的同源性。由所测序列编码区（１－８９１ｎｔ）可推导产生２９６个氢基酸,并与ＷＳＳＭＶ－Ｆ及ＢａＹＭＶ外壳蛋白氨基酸序列分别具有７５．９％和７１％的同源性。此结果表明,ＦＷＭＶ－Ｃ为另外一种不同于ＷＳＳＭＶ－Ｆ的大麦黄花叶病毒组（Ｂａｙｍｏｖｉｒｕｓ）病毒,所测基因组片段应为ＲＮＡ－１３＇末端序列,其中可能包括了病毒全长外壳蛋白编码区域。     

甜菜坏死黄脉病毒外壳蛋白基因的克隆和序列分析

以甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)内蒙分离物的RNA为模板,通过PcR扩增获得外壳蛋白(CP)基因的目的片段。将其重组到pGEM一7zf(+)并转化JMl01得到了含有完整CP基因的重组子。采用双脱氧终止法进行序列分析,结果表明CP基因为567nt,与文献(1]报道相比,氨基酸和核苷酸的同源性分别为98．4％和96．7％。     

利用原生质体融合研究凤尾菇中性菌株的交配反应

凤尾菇营养缺陷型突变型中性菌株与另一株营养缺陷型的正常交配型菌株进行了原生质体融合反应融合子之间以及与亲本之间在菌落形态和菌丝生长速度上表现出了较大差异。融合子菌落角变的菌丝体多核体转变为双核体,并且在菌丝体上产生了圆桶状的特殊结构而不是通常的锁状联合。初步观察表明这些结构似乎与细胞核的迁移有关,对融合子子实体的担孢子进行了遗传分析,结果确实了实体是由两个亲本菌株的融合子产生,同时也表明要对中性菌株交配反应中基因重组进入深入分析还需要进行更多的研究。     

凤尾菇和裂褶菌原生质体非对称融合研究

具有双重营养缺陷型的裂褶菌单核体突变菌株的原生质体经过灭活处理后作为供体与同样带有营养缺陷型标记的风尾菇单核体原生质体融合,得到大量生长速度和菌落形态差异较大的多核体和双核体融合子．这些融合子主要显示了供体菌株的特性,数次转接后,有的融合子从多核体转变成双核体,有的融合子完全恢复了供体亲本双核体的遗传特性,同时获得了一些有意义值得继续探讨的新的生理特性,如菌丝体在木屑 皮以及废棉培养料上生长速度较快,在平板培养基和木屑培养料上均较早较快地形成原基和子实体等．结果表明原生质体非对称融合是一种效率较高的融合方式,可以作为食用菌育种的一种有效途经．     

蛹虫草子囊孢子萌发及其后代群体培养性状观察

从野生和人工栽培的蛹虫草子实体共分离了6个子囊孢子群体,对子囊孢子形态、萌发过程、培养性状及子实体产生等进行了观察。结果表明,蛹虫草子囊孢子为线形、多细胞,169.78~364.57×1.72~2.04μm;每个子囊孢子有56~114个细胞,每个细胞大小为1.77~4.53×1.72~2.04μm。子囊孢子弹射后13h开始萌发,30h后开始形成分生孢子。多数子囊孢子的每个细胞都能萌发,但少数子囊孢子的部分细胞不萌发。子囊孢子群体的培养性状表现多样性,以I型所占比列较大。野生群体的菌落颜色以杏橙色和淡柠檬黄色为主,而人工栽培的群体以橙铬色所占比例最大。不同个体的菌落生长速率有差异。野生群体产生扇形突变的比例高于人工栽培群体。在人工栽培的CM群体中出现了气生菌丝较多、白色、生长缓慢的个体。菌落为I型,橙铬色或杏橙色,生长速率正常,无突变的单子囊孢子菌株产生子实体的可能性较大,子实体产量较高,但大部分单子囊孢子菌株不能产生发育良好的子实体。     

甜菜黑色焦枯病毒新疆分离物基因组RNA的序列分析及侵染性cDNA克隆构建

甜菜黑色焦枯病毒(Beet black scorch virus,BBSV)新疆分离物(BBSV-X)和宁夏分离物(BBSV-N)分别来自生态环境不同的新疆和宁夏的甜菜产区,自然条件下,BBSV-X含有卫星RNA,BBSV-N不含有卫星RNA。为明确二者的分子差异,以BBSV-X基因组RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得了全长cDNA克隆。序列分析显示,BBSV-X基因组RNA全长为3 644个核苷酸,与以往报道的BBSV-N相同,且核苷酸序列一致性高达99.45%。除5′和3′非翻译区各有一个核苷酸发生变异外,核苷酸序列差异主要存在于ORF1通读区和ORF6,氨基酸序列差异仅存在于ORF1的通读区。构建获得了BBSV-X的侵染性cDNA克隆,用体外转录物定量接种了苋色藜(Chenopodiumamaranticolor)和豇豆(Vigna sinensis),结果显示BBSV-X与BBSV-N之间在致病性上存在一定的差异。