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为了探索鸡原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)适合的培养体系,我们在已构建的分泌型真核表达载体pSecTag-mlif(sp-)的基础上,通过脂质体介导将mlif转染到鸡PGCs和鸡胚胎成纤维(Chicken embryonic fibroblast, CEF)细胞中,48 h后收集细胞上清液,蛋白印迹均检测到小鼠白血病抑制因子(mLIF)的表达.以CEF细胞作饲养层,分七组来培养鸡PGCs,结果发现四组和五组培养的PGCs生长状态最好,三组传代后开始2-3天生长状况较好,3天后克隆周围有明显的分化现象.本实验将已构建了含mLIF基因的分泌型真核表达载体成功地瞬时转染到PGCs和CEF细胞中,且表达的mLIF具有维持鸡PGCs未分化状态的功能. 相似文献
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在发现利用钙离子螯合剂EGTA螯合细胞外钙离子(Ca 2 )后,可以显著抑制促滤泡(激)素(FSH)刺激体外培养的颗粒细胞合成和分泌雌激素,并且该抑制作用呈剂量依赖性.假设该特异性反应是通过Ca2 影响细胞内腺苷酸环化酶(AC)发挥作用的,因为Ca 2 具有激活ACVIII的作用.通过RT-PCR和Northern印迹检测大鼠不同阶段卵巢组织中ACVIII的表达.结果表明,虽然Ca2 可以调控颗粒细胞类固醇激素的合成,但不同阶段的卵巢组织中均检测不到ACVIII的mRNA.实验间接提示了Ca2 促进颗粒细胞成熟的作用不是通过ACVIII发挥作用的,而可能是通过其他AC同工酶或其他Ca2 信号通路发挥作用. 相似文献
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用BRL-3A条件培养基培养鸡胚胎干细胞的初步研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以CEF细胞、MEF细胞和STO细胞为饲养层,用:BRL-3A条件培养基培养寿光鸡X期胚盘细胞,并对获得的细胞克隆进行了鉴定,证明其具有ES细胞的克隆形态、PAS染色阳性、AKP染色阳性、能分化为多种类型的细胞、能参与受体胚胎的发育并形成羽色嵌合体.实验结果表明:BRL-3A条件培养基能促进鸡ES细胞克隆的形成,用饲养层比不用饲养层更有利于克隆的形成,且STO细胞和MEF细胞饲养层的培养效果要好于CEF细胞饲养层(P<0.05);挑克隆传代法比全消化法更有利于克隆的形成和未分化状态的维持(JP<0.05). 相似文献
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