三链核酸稳定性和生物学功能的研究进展

近10年来三链核酸的研究发展迅猛,已经成为分子生物学和基因工程的一个前沿领域.综述了最近在三链核酸稳定性和生物学功能方面的研究进展.较为详细地讨论了影响三链稳定性的各种内源和外源因素如：寡聚脱氧核苷酸(ODN)的长短 、序列、碱基修饰、骨架结构以及温度、酸度、离子强度 、配基等,同时对三链核酸的生物学功能进行了初步的总结,这些功能包括：控制基因转录,保护靶序列防止酶切,充当分子剪刀进行特定位点切割等.     

盐离子诱导DNA分子的凝聚现象的AFM观察

通过对不同浓度的λ－ＤＮＡＨｉｎｄＩＩＩ进行ＡＦＭ观察,发现它在高浓度下形成一种绊环状的超螺旋,依次降低其浓度,这种超螺旋结构逐渐解旋,伸展为松弛状态下的分子,而同样条件经Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ－３０去盐处理的样品在高浓度下则未发现相似的结构,重新加入Ｎａ＋,Ｍｇ２＋等盐离子后,伸展的分子又聚集成绊环状结构。ＣＤ谱测定也显示介质中的盐浓度与ＤＮＡ结构有关。上述结果表明Ｎａ＋,Ｍｇ２＋等盐离子对于ＤＮＡ分子的凝聚起着重要作用。     

HeLa细胞内DNA的抗酶（DNase I）组分和AFM直接观察

从ＨｅＬａ细胞提取的ＤＮＡ经ＤＮａｓｅＩ酶解后,发现有两种抗酶组分（Ｂ和Ｃ）,凝胶电泳结果显示组分Ｂ的分子大小要超过２００００ｂｐ,而组分Ｃ的分子大小相当于４０￣５０ｂｐ。这两种组分在原子力显微镜下的形态都明显不同于标准的双链ＤＮＡ,其中组分Ｂ与以前观察到的苷－ＤＮＡ变异结构较为相似,组分Ｃ则未见报道,根据其分子的表观宽度和高度推测可能为四链结构,此外,荧光实验还表明这两种组分可与ＥＢ相互作用,使     

补骨脂素—UVA对端粒DNA的直接作用及其原子力显微镜研究

HeLa细胞DNA,经Rsal(1250U)和HinF1(1250U)内切酶酶解、Bio-gel P-2柱分离,得到端粒DNA。原子力显微镜（AFM）的直接观测结果表明在UVA照射下,补骨脂素可结合到端粒DNA的特殊位置,其光交链产物随照射时间增长而增加。与此同时,P53表达和端粒酶活性发生变化。纯化的端凿DNA片段在AFM下呈带尾的T－环结构（T-loop）。按其高度判断T－环部分为双链DNA结构,T－环与尾部交接处具有三链或四链结构特征。     

HeLa细胞内DNA的抗酶(Dnase Ⅰ)组分和AFM直接观察

从HeLa细胞提取的DNA经DNaseⅠ酶解后,发现有两种抗酶组分(B和C).凝胶电泳结果显示组分B的分子大小要超过20000bp,而组分C的分子大小相当于40～50bp.这两种组分在原子力显微镜下的形态都明显不同于标准的双链DNA,其中组分B与以前观察到的λ-DNA变异结构较为相似,组分C则未见报道,根据其分子的表观宽度和高度推测可能为四链结构.此外,荧光实验还表明这两种组分可与EB相互作用,使其荧光增强.