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目的 探讨FasL基因重组慢病毒载体感染SD大鼠树突状细胞的效率和FasI 蛋白的表达情况,为进一步研究转FasL基因在同种异体器官移植中诱导免疫耐受和保护移植物打下基础.方法 将培养一周的细胞重铺于六孔板中,每孔细胞数量为5×105,24 h后观察,细胞适合感染,按照MOI=10感染细胞,使用GFP阳性对照质粒作对照实验,感染24 h后,培养皿中添加1 ml新鲜培养基,每隔1 d加细胞因子继续培养,荧光显微镜观察荧光强度和数量,添加病毒液后10 d收集细胞进行实时定量检测和WB检测.结果 FasL基困重组慢病毒载体感染DC 8 d后,细胞开始出现荧光,10 d感染效率为100%;实时定量PCR检测瞬时转染后目的 基因的表达显示以细胞的1.00%为参照,Cell+FasL质粒为167.03%;免疫印迹检测转染后FasL蛋白的表达显示以细胞的1.00%为参照,细胞+FasL质粒为34.15%.结论 FasL基因重组慢病毒载体成功感染DC,实时定量PCR及Western印迹证实感染的Dc表达FasL明显提高.为进一步研究转FasL摹因在同种异体器官移植中诱导免疫耐受和保护移植物打下基础. 相似文献
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以标记在ATP酶(F_1)催化部位的TNP-ATP为荧光探针,比较测定了F_1与其抑制蛋白(IF_1)结合前后的TNP-ATP荧光光谱、荧光寿命和荧光偏振光谱。结果表明在IF1的作用下,酶分子催化部位的极性下降,TNP-ATP分子运动的自由度减小,提示IF_1引起了F_1催化部位的构象改变。 相似文献
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牛心线粒体ATP酶与其抑制蛋白结合特性的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
利用荧光偏振光谱和生物分子相互作用分析技术(BIA)对线粒体ATP酶(F1)与其抑制蛋白(IF1)的结合特性进行了研究。结果表明,在弱酸性条件下Mg-ATP能够大大促进IF1与F1的结合,结合的IF1对F1-ATP酶表现出最大的抑制活性。在弱酸性没有Mg-ATP存在的条件下,IF1也可与F1发生一定量的结合(20~30%),F1的水解活性也受到同等程度的抑制,IF1的抑制活性与IF1、F1的结合其间显示了密切的量效关系,提示在IF1与F1的作用过程中不存在无抑制活性的结合过渡态。Zn2+能够抑制IF1组氨酸残基的质子化,从而阻断IF1与F1之间的结合反应 相似文献
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