鼠疫耶尔森氏菌rV270抗原的克隆、表达及其免疫保护作用评价

目的：为研制鼠疫亚单位疫苗,克隆、表达并纯化去除产生免疫抑制作用序列后的鼠疫耶尔森氏菌LcrV抗原（rV270）。方法：依据已知的LcrV的核苷酸序列,避开其产生免疫抑制作用的区段设计引物,扩增rV270基因并克隆到pET24a载体中,在大肠杆菌BL21中表达His-rV270融合蛋白：表达产物先后经Co^2＋亲和层析和Sephacryl S-200HR凝胶柱纯化,并在纯化过程中应用凝血酶切除His标塔;氢氧化铝佐剂吸附重组抗原后免疫BALB／c小鼠,初次免疫后第21天加强免疫1次,第5周使用104CFU鼠疫菌141强毒株攻毒,测定其免疫保护作用。结果：rV270以可溶性方式表达;应用Co^2＋亲和层析柱和Sephacryl S-200HR凝胶柱结合凝血蛋白酶切除His标签的方法可得到不含标签的较高纯度的重组蛋白;攻毒实验中实验组小鼠全部存活,而对照组全部死亡。结论：获得了具有良好免疫保护作用的rV270蛋白,可用于鼠疫亚单位疫苗的研究。     

城市热岛“源-汇”景观识别及降温效率

快速城市化背景下,不同景观降温效率的差异是深入理解景观格局对城市热岛效应影响机理的基础。现有城市热岛研究多以土地利用或土地覆被替代热岛效应的源与汇,往往忽略景观的热特征与相邻景观的热关系,造成信息偏差。需要从景观热特征的视角,探讨面向城市热岛效应的景观分类方法,并分析不同特征景观的降温效率差异。基于"源-汇"景观理论,以深圳市西部为研究区,构建面向城市热岛的景观分类方法,通过2010年TM遥感影像提取NDVI、NDMI及ISA等地表特征及地表温度特性,叠加划分16类城市景观,分析不同地表特征的景观等距离梯度下的温度变化关系,识别城市热岛的"源-汇"景观。在此基础上,分析"源-汇"景观的结构特征,构建以面积和温度为影响因素的景观降温效率指数,结合景观格局指数,分析不同面积与形状的"汇"景观降温效率。结果表明,在16类景观中,5类景观被识别为城市热岛汇景观,面积约533 km~2,占研究区总面积的45.5%。降温效率结果表明,"汇"景观的降温效率为1.54,其中绿色空间及阴影景观的降温效率贡献率较高。通过面积与形状的景观格局分析发现,降温效果随两个指数的增加,均呈先升后降的趋势。研究结果为城市规划与城市绿色基础设施建设决策中降温景观的形状和面积设定提供依据,增加景观水平的缓解热岛效应的效率。     

壳聚糖作为基因治疗载体的研究

本文从壳聚糖－DNA复合物／微球的形成方法和机理,稳定性,转染细胞效率等方面综述了壳聚糖在基因治疗领域目前的研究现状。     

营养液缺钙或缺钾对糜子幼苗抗旱性的影响

糜子幼苗生长于完全、缺钙、缺钾、缺钙并缺钾４种营养液中。水分胁迫下,各种幼苗相对含水量均下降,造性增强。其中,单缺钾及缺钙并缺钾时相对合水量比完全及单缺钙时下降较大,单缺钙时透性更易增强。水分胁迫下,完全营养苗游离脯氨酸含量明显高于对照,而其它３种苗的游离脯氨酸含量与其对照之间差异不显著。水分胁迫４８ｈ,缺钾苗和缺钙并缺钾苗叶肉细胞有质壁分离现象,叶绿体受到一定程度的损伤,单缺钾时超微结构损伤尤甚。另外,钙调蛋白抑制剂实验表明,干旱胁迫引起的幼苗体内游离脯氨酸含量的增加可能与钙调蛋白无关。     

过氧化氢预处理对H9c2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用

目的：活性氧介导的氧化损伤是缺血再灌注损伤的重要机制,本研究通过观察H2O2预处理对氧化损伤的H9c2心肌细胞存活率和细胞凋亡的影响,探讨其保护H9c2心肌细胞的作用机制。方法：体外培养H9c2心肌细胞,取对数生长期细胞用于实验研究。建立H2O2预处理抵抗高浓度H：O：诱导的细胞氧化损伤模型,实验分组如下：（1）正常对照组（CTL）;（2）损伤组（INJURY）;（3）预处理组十损伤组（PC）。应用CCK8法检测细胞存活率;试剂盒检测胞内MDA水平和T．sOD活性;Hoechst33258染色观察凋亡形态;Annexin-V／PI双染与流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：25vLmol／L的H202预处理90rain能明显地保护H9c2心肌细胞抵抗400μmol／LH2O2诱导的氧化损伤,提高细胞存活率,下调MDA水平,上调SOD活性,抑制细胞凋亡,降低细胞凋亡率。结论：低浓度H2O2预处理能减轻H9c2心肌细胞的氧化损伤,抑制氧化损伤诱导的心肌细胞凋亡,具有很好的抗氧化损伤和抗心肌细胞凋亡的保护作用,其作用机制可能与细胞SOD活性上调有关。H2O2预处理为临床治疗心肌缺血／再灌注损伤提供了一项新策略。     

一种含精-甘-天冬氨酰三肽人纤溶酶原K区缺失突变体在巴斯德毕赤酵母中的表达、纯化与特性

为获得具有抗血小板聚集作用的重组人纤溶酶原 (hPLG),本研究尝试了一种含有精-甘-天冬氨酰 (RGD) 三肽的hPLG K区缺失突变体 (RGD-hPLG-?K)。首先,从pDNR-LIB-HPLG.中克隆出HPLG-?K。然后定点突变激活环内的Pro559为Asp559,形成RGD模序。构建的pPICZαA-RGD-HPLG-?K电转化巴斯德毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达后可产生0.16 g/L培液的RGD-hPLG-?K,Ni-NTA层析后纯度可达90％以上;Western blotting证实所获RGD-hPLG-?K可与兔抗hPLG抗血清反应;其24 h尿激酶激活速率和纤溶活性与hPLG-?K无显著差别 (P=0.630,n=5);经尿激酶激活后,RGD-hPLG-?K的血小板聚集抑制率 (21.8％±1.57％) 显著高于hPLG-?K (3.8％±0.33％) (P=0.000,n=5)。表明成功构建、表达了一种具有抗血小板聚集活性的hPLG突变体,为研究新型多功能溶栓药物奠定了基础。     

液氮冷冻大鼠左冠状动脉前降支中上1／3所支配区域建立心肌梗死模型

目的探讨大鼠左冠状动脉前降支中上1／3所支配的区域液氮冷冻处理后对心肌形态学及心功能的影响,以建立适合移植干细胞再生修复心肌梗死研究的一种新的大鼠心肌梗死模型制作方法。方法80只雄性SD大鼠,随机分为3组即：冷冻组、结扎组、对照组。大鼠麻醉后,行气管插管连通动物呼吸机,打开胸廓暴露心脏,用特制的直径为0．6cm冷冻头置入液氮中冷冻降温后迅速冷冻大鼠左冠状动脉前降支中上1／3所支配的区域,或结扎左冠状动脉前降支中上1／3处。分别于处理后1d、3d、7d、14d、28d观察心脏病理组织学变化,并于处理28d后检测心功能的变化。结果在液氮冷冻大鼠心脏后,大鼠心肌组织出现凝固性坏死,继而有肉芽组织长人梗死灶内,最后形成疤痕。用液氮冷冻法可成功复制心肌梗死大鼠动物模型。与冠状动脉结扎法相比较,操作简单,手术时间短,死亡率低．心肌梗死面积变异小。结论液氮冷冻法作为一种复制心肌梗死模型的方法,有其自身的优势．可用于心肌梗死发生机制和干细胞治疗等方面的研究。     

营养液缺钙或缺钾对糜子幼苗抗旱性的影响

糜子幼苗生长于完全、缺钙、缺钾,缺钙并缺钾４种营养液中,水分胁迫下,各种幼苗相对含水量增下降,透性增强,其中,单缺钾及缺钙并缺钾时相对含水量比完全及单缺钙时下降较大,单缺钙时透性更易增强,水分胁迫下,完全营养苗游离脯氨酸含量与其对照之间差异不显著。水分胁迫４８ｈ,缺钾苗和缺钙并缺钾苗叶肉细胞有质壁分离现象,叶录体受到一定程度的损伤,单缺钾时超微结构损伤尤甚。另外,钙调蛋白抑制剂实验表明,干旱胁迫引     

Bax基因诱导鼻咽癌细胞中相关基因的mRNA差异显示分析

目的：应用差异显示技术,筛选鼻咽癌相关基因的异常表达。方法：选用连接有bax基因的真核表达质粒pSFFV-bax-neo, 采用脂质体转染法, 将其转染到CNE2细胞中, 以转染有空载的pSFFV-neo 质粒的CNE2细胞为对照, 采用Trizol试剂快速抽取法, 提取mRNA经逆转录成cDNA,用锚式引物和随机引物进行PCR扩增, 加入同位素, 用6%的测序变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳PCR产物进行分离。切下聚丙烯酰胺凝胶上明显的6条差异带, 回收差异cDNA, 进行第二次PCR扩增, 经低溶点琼脂凝胶回收, 获取大量PCR扩增的差异cDNA片段,同位素标记作为探针, 抽取RNA, 进行点样, 杂交, 洗膜放射自显影等步骤, 进行细胞RNA的Northern印迹斑点杂交。结果：表明4条cDNA片段均为CNE2细胞表达片段。结论：发现bax可诱导CNE2细胞中有某些相关基因表达,并抑制了CNE2细胞某些相关基因表达。