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1.
肉桂酸4-羟基化酶(cinnamic acid 4-hydroxylase,C4H)是苯丙烷代谢途径中的关键酶,在植物黄酮类物质合成代谢过程中发挥重要作用。鲜切荸荠贮藏过程中由于黄酮类物质积累而导致的黄化现象很可能离不开C4H的参与。本研究利用RACE技术在荸荠中克隆得到C4H基因cDNA全长,命名为Cw C4H(GenBank登录号:MG719237),该序列长度为1736 bp,编码一条由505个氨基酸组成的多肽,分子量为57.826 kD。Cw C4H包含细胞色素P450结构域,其二级结构以α-螺旋为主。多重比对结果表明,CwC4H具有该基因家族特有的保守结构域并与其它植物的C4H蛋白有很高的相似性。系统进化分析表明CwC4H与高粱C4H蛋白亲缘关系较近。荧光定量PCR分析表明,鲜切荸荠黄化过程中Cw C4H表达量快速上升,水杨酸处理抑制了鲜切荸荠的黄化和CwC4H的表达。  相似文献   
2.
为获得具有抗血小板聚集作用的重组人纤溶酶原 (hPLG),本研究尝试了一种含有精-甘-天冬氨酰 (RGD) 三肽的hPLG K区缺失突变体 (RGD-hPLG-?K)。首先,从pDNR-LIB-HPLG.中克隆出HPLG-?K。然后定点突变激活环内的Pro559为Asp559,形成RGD模序。构建的pPICZαA-RGD-HPLG-?K电转化巴斯德毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达后可产生0.16 g/L培液的RGD-hPLG-?K,Ni-NTA层析后纯度可达90%以上;Western blotting证实所获RGD-hPLG-?K可与兔抗hPLG抗血清反应;其24 h尿激酶激活速率和纤溶活性与hPLG-?K无显著差别 (P=0.630,n=5);经尿激酶激活后,RGD-hPLG-?K的血小板聚集抑制率 (21.8%±1.57%) 显著高于hPLG-?K (3.8%±0.33%) (P=0.000,n=5)。表明成功构建、表达了一种具有抗血小板聚集活性的hPLG突变体,为研究新型多功能溶栓药物奠定了基础。  相似文献   
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