孢子丝菌复合体分子分型研究进展

孢子丝菌复合体属于双相真菌,全球分布,可引起人类及动物的慢性深部感染。不同地域的菌株在致病力、传播途径及药物敏感性等方面均存在差异。孢子丝菌病作为一种人兽共患病,其发病率逐年上升,出现多次暴发流行。分子分型不仅是明确感染源和传播途径、预防和控制疾病流行的有力手段,同时有助于了解孢子丝菌基因型与表型的相关性,在研究其致病机制以及临床诊治过程中都具有十分重要的意义。本文对孢子丝菌的分子分型方法的研究进行综述。     

类黄酮对AM真菌及宿主植物的影响研究

类黄酮[apigenin(4,5,7-trihydroxyflavone,4,5,7-三羟基黄酮)和hesperitin(3?5,7trihydroxy4?methoxyflavanone,3?5,7-三羟-4-甲氧基黄烷酮)]对接种AM真菌的紫云英的生物量、AM真菌侵染率、菌丝ALP(碱性磷酸酶)和SDH(琥珀酸脱氢酶)活性都有显著影响。对于Glomusintraradices侵染的紫云英的生物量,4,5,7-三羟基黄酮处理组第6周有显著差异(生物量分别为6.3g、5.7g和6.5g,而对照为3.0g),3?5,7-三羟-4-甲氧基黄烷酮处理组三次取样都有显著差异;对于Endo-1(一个商业菌剂,由Glomusintraradices和Glomusmosseae组成)侵染的紫云英的生物量,4?5,7-三羟基黄酮处理组第6周1.5mmol/L组和第9周150nmol/L组都有显著差异(生物量分别为7.2g和16.8g,而对照为4.1g和8.1g),3?5,7-三羟-4?甲氧基黄烷酮处理组第6、9周都有显著差异,尤以第9周150nmol/L组差异更大(生物量为14.4g,而对照为8.1g)。对于G.intraradices的侵染率,与对照相比,4?5,7-三羟基黄酮处理组三次取样都有显著差异(第9周对照为36.6%,而处理组分别为71.5%、80.8%和75.9%);3?5,7-三羟-4?甲氧基黄烷酮处理组三次取样也有显著差异,尤以150nmol/L组效果最好(第9周AM真菌侵染率为94.8%,而对照为36.6%);对于Endo-1的侵染率,与对照相比,4,5,7-三羟基黄酮处理组三次取?     

miR-1165-3p、miR-145水平在支气管哮喘患者中的表达及其临床意义

摘要 目的：探讨微小RNA（MicroRNA,miR）-1165-3p、miR-145水平在支气管哮喘患者中的表达及其临床意义。方法：收集2021年1月-2022年3月中国人民解放军总医院第六医学中心62例支气管哮喘患者作为研究组,其中轻度急性发作27例,中度急性发作22例,重度急性发作13例。另收集同时期、同年龄段30例健康体检者作为对照组。采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测各组血清miR-1165-3p、miR-145表达水平。采用Spearman相关分析不同程度支气管哮喘患者与血清miR-1165-3p、miR-145之间的相关性。通过受试者工作特征（ROC）分析血清miR-1165-3p、miR-145表达水平对不同程度支气管哮喘的诊断效能。结果：与对照组相比,研究组中白细胞介素-6（IL-6）、嗜酸性粒细胞、总免疫球蛋白E（IgE）水平显著升高,第1秒用力呼气容积（FEV₁）占预测值百分比（FEV₁%）则显著降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。不同严重程度支气管哮喘患者（轻度、中度、重度）血清miR-1165-3p、miR-145表达水平均高于健康对照组,支气管哮喘越严重,其表达水平越高,且组间、组内比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。Spearman相关分析显示,miR-1165-3p、miR-145、IL-6表达水平与哮喘严重程度呈正相关（P＜0.05）,FEV₁%与哮喘严重程度呈负相关（P＜0.05）,嗜酸性粒细胞、总IgE与哮喘严重程度无相关性（P＞0.05）。对轻度、中度、重度急性支气管哮喘发作的诊断效能显示：血清miR-1165-3p的曲线下面积（AUC）（0.95CI）分别为3.085（0.326～29.221）、0.712（0.611～0.829）、0.755（0.602～0.948）。血清miR-145的AUC（0.95CI）分别为0.833（0.708～0.979）、0.754（0.590～0.964）、0.816（0.671～0.993）。结论：血清miR-1165-3p、miR-145表达水平具有较高的诊断效能,支气管哮喘越严重,诊断的特异性越高,可作为支气管哮喘严重程度的无创诊断指标。     

乙酰化修饰降低Ku蛋白的DNA结合活性

【目的】研究乙酰化修饰对Ku蛋白活性的影响。【方法】利用耻垢分枝杆菌为表达菌株,转入Ku蛋白表达质粒,纯化具有乙酰化修饰的Ku蛋白和无乙酰化的Ku蛋白突变体,比较两类蛋白的生化活性;分析氧化压力和酸性环境下耻垢分枝杆菌细胞内Ku蛋白乙酰化水平的变化。【结果】Ku蛋白过量表达的耻垢分枝杆菌比转入空质粒的对照菌株生长缓慢;乙酰化Ku蛋白比未发生乙酰化Ku蛋白修复断裂DNA的活性降低、DNA结合活性降低;氧化压力和酸性压力环境下,耻垢分枝杆菌细胞内Ku蛋白数量降低,乙酰化Ku蛋白数量变化不大。【结论】乙酰化修饰能够调节Ku蛋白的DNA结合活性,从而调节非同源末端连接修复系统的活性;Ku蛋白乙酰化程度升高是耻垢分枝杆菌对不良生长环境的反应。     

魔芋内生拮抗细菌的分离及其抗菌物质特性研究

从魔芋的内生菌中筛选到能抑制魔芋软腐病病原菌生长、产芽胞的杆状细菌,16SrDNA序列分析表明该菌是一株枯草芽胞杆菌,命名为BSn5。BSn5的胞外蛋白提取液有抗菌活性,并具有对热不稳定,对蛋白酶K敏感,对胰蛋白酶不敏感的特性,SDS-PAGE检测显示该蛋白提取液仅由分子量为31.6kDa的蛋白质组成。通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化该蛋白,纯化的蛋白能够抑制软腐病病原菌的生长,进一步表明该31.6kDa蛋白即为该菌的抗菌活性物质。该蛋白与目前所知的枯草芽胞杆菌产生的抗菌物质均不同,可能是一种新的抗菌蛋白。     

武夷山地伯乐树种群遗传多样性的ISSR分析

伯乐树（Bretschneidera sinensis Hemsl.）为我国特有单型科珍稀濒危植物,具重要的科研价值。本研究采用ISSR分子标记对武夷山脉分布的5个伯乐树天然种群和1个移栽种群进行遗传多样性分析。结果表明伯乐树物种水平遗传多样性较高（PPB：75.70%;H_ES：0.304 5;H：0.450 1）,种群水平则较低（PPB：60.13%;H_EP：0.238 1;H：0.347 5）,MJY种群和BSZ种群分别是所有种群中遗传多样性最高和最低的。5个地理种群间遗传分化程度较高（G_st=0.218 1）,原因可能源于伯乐树的繁殖方式及生境片段化,Mantel检验也证实了地理距离与遗传距离具有显著相关性（r=0.626 7,P＜0.05）。针对伯乐树种群遗传多样性现状,建议加强现有自然种群的就地保护,促进种群自然更新。     

START家族Rv0164蛋白在耻垢分枝杆菌中的表达及垂钓互作蛋白

【目的】START家族蛋白的突变或者错误表达使哺乳动物产生肾上腺皮质增生、乳腺癌和结肠癌等疾病;START家族蛋白是植物发育过程中重要的调节因子;尚未阐明START家族蛋白作为细菌必需基因的作用机制。结核分枝杆菌必需基因Rv0164属于START家族,功能未知,研究Rv0164作用机制将为START家族分子机制增添新理论。【方法】生物信息学方法分析Rv0164序列特征;模式菌耻垢分枝杆菌中表达Rv0164并分析蛋白的细胞定位;Co-immunoprecipitation(Co-IP)方法垂钓Rv0164的相互作用蛋白,质谱鉴定互作蛋白,酵母双杂交和Pull down验证蛋白相互作用。【结果】Rv0164的N端17个氨基酸在分枝杆菌中不保守;Rv0164无信号肽;Rv0164定位在细胞质中,受蛋白降解机制调控,该机制在细菌生长平台期比对数期活性弱;N端缺失使Rv0164在平台期和对数期均不稳定;Rv0164结合多个胞内蛋白。【结论】Rv0164的N端肽段增加了蛋白的稳定性;Rv0164是一个胞内蛋白;Rv0164能够结合细菌生存必需蛋白。     

利用串联亲和纯化的方法筛选耻垢分枝杆菌中MutM的相互作用蛋白

Mut M(formamidopyrimidine-DNA glycosylase,Fpg)是原核生物碱基切除修复系统(BER)中同时具有DNA糖苷酶和脱嘌呤/脱嘧啶AP裂解酶活性的一种双功能酶,不但可以识别DNA损伤,而且能切除损伤的碱基,从而参与到许多种损伤的修复过程.除了高致突变率的8-羟基鸟嘌呤(8-oxoguanine,8-oxo G)外,Mut M在其他损伤修复中具体作用机制还不清楚.本研究主要以耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)为研究对象,利用串联亲和纯化技术和质谱相结合的方法对可能与Mut M相互作用的蛋白因子进行发现和鉴定,并于体外用Far-western和GST pull-down方法对鉴定出的蛋白DEAD-box rna helicase、Rps C、Uvr A与Mut M的相互作用进行了验证.实验结果表明,利用串联亲和纯化方法来发现Mut M相互作用的蛋白是切实可行的.本研究为进一步深入研究Mut M在其参与的损伤修复中的具体机制提供了切入点.     

两株超级广泛耐药结核分枝杆菌全基因组比较分析

【目的】结合现有数据,通过对两株临床超级广泛耐药的结核分枝杆菌全基因组的测序和分析,发现其型别相关的突变位点,解释发生广泛耐药的基因组突变机制。【方法】利用Solexa第二代测序技术对两株广泛耐药结核分枝杆菌(FJ05194和GuangZ0019)进行全基因组测序分析。以H37Rv为参考序列得到两株广泛耐药菌株的单核苷酸多态性(SNPs),构建系统发育树鉴定菌株型别,判断突变位点中型别相关和非型别相关的SNPs。定位SNPs所在的基因组区域,对型别相关的突变基因进行KEGG通路的富集分析,对非型别相关的突变基因和间隔区判断是否与耐药相关。【结果】两株广泛耐药菌株分别属于Lineage2和Lineage4型别,两菌株在碱基替换方面存在差异性,Lineage2型别相关的基因功能富集于ABC转运蛋白和核苷酸切除修复的通路。耐药方面,发现了已知的耐药相关基因的突变(rpoB、katG、rpsl、gyrA、gyrB、embB和ethA等),但卷曲霉素和卡那霉素相关的rrs、tlyA和eis启动子区域未发生突变,不足以解释其耐药性的产生。与最新报道的候选耐药基因比较,发现了卷曲霉素和卡那霉素相关的突变(Rv1393c、Rv0265c和narX等)和外排泵相关的pstB、Rv2333c和Rv2687c突变。【结论】结核分枝杆菌Lineage2型别相关的SNPs中含有影响结核分枝杆菌突变率和耐药性的突变。对于两株超级广泛耐药的结核菌,已知的激活药物或药靶相关的单耐药基因突变集合不能完全解释其广泛耐药性,还涉及新候选结核耐药基因、外排泵和补偿等其他潜在机制的相关基因突变。