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目的:用真核表达系统可溶性表达重组马尔堡病毒糖蛋白GP1亚基并纯化。方法:从糖蛋白(GP)全长基因上扩增GP1基因序列,克隆至真核表达载体pcDNA3.4,在哺乳动物表达系统中进行表达,镍柱亲和层析纯化目的蛋白,ELISA检测重组蛋白与特异抗体的免疫反应性。结果:GP1在哺乳动物表达系统中获得可溶性表达,纯化得到的目的蛋白与特异抗体具有良好的结合活性,推测其构象与天然马尔堡病毒GP1具有相似性。结论:真核表达了马尔堡病毒糖蛋白GP1亚基,且目的蛋白具有良好的抗原性,可用于GP特异抗体筛选、疫苗效果评价等研究。 相似文献
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目的:制备重组可溶性截短型马尔堡病毒包膜糖蛋白(MAGP),并验证其抗原性。方法:PCR扩增MAGP截短片段MAGP_(40-289)、MAGP_(148-526)、MAGP_(240-526)和MAGP_(258-526),克隆至原核表达载体pET-32a并转化至大肠杆菌进行诱导表达,经亲和层析、阴离子交换层析获得纯度良好的可溶性截短蛋白抗原,利用ELISA试验对该蛋白的抗原性进行验证。结果:截短抗原MAGP_(240-526)在大肠杆菌中可溶性表达良好,表达量约17 mg/L;Western印迹显示该抗原能与Ad5-MAGPopt免疫后的小鼠血清发生特异反应。结论:经原核系统表达的截短型MAGP具有良好的抗原性,可用于检测相关疫苗激发的抗MAGP抗体水平或评价抗MAGP的结合活性。 相似文献
3.
目的：对获得的3株肠道病毒71（EV71）型毒株进行全基因组序列测定,并对其进化特点及分型进行初步分析。方法：提取病毒RNA,反转录得到eDNA,PCR分段扩增覆盖病毒全长序列的6个重叠片段（不包括多聚腺苷酸尾）;用软件将3株EV71的备片段序列进行拼接、编辑和校正,随后进行氨基酸翻译及序列比较;用MEGA4.1软件构建系统进化树。结果：获得了3株EV71的全长序列：GDV103株基因组全长7404 nt,包括741bp的5’端非编码区（UTR）、6582bp的病毒基因组编码区（ORF）及81bp的3’UTR;安徽株（Anhui2007）基因组全长7405nt,包括742bp的5＇UTR、6582bp的ORF及81bp的3＇UTR;VR1432株基因组全长7408nt,包括743bp的5’UTR、6582bp的ORF及83bp的3’UTR长。经同源性比对和进化树分析,证实GDV103和安徽株EV71属于C基因型的C4基因亚型。而VR1432株则属于C基因型的C2基因亚型。结论：获得了3株EV71的全长基因组序列,并进一步探讨了其型别,为下一步的干扰素保护宴,哈重定了基础． 相似文献
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