草菇低温胁迫初期应答关键通路的探究

本研究利用表达谱芯片技术解析了低温胁迫初期（0-120min）不同低温处理时间草菇转录组水平的变化。芯片结果分析发现在低温诱导过程中,低温处理20min内变化基因的功能为单加氧酶、氧化还原酶和细胞内的氧化还原。低温处理40min时表达差异基因具有结合RNA的功能。80min的时间段内,基因的功能比较集中于核酸物质和能量的代谢。CYP450的代谢途径在20-40min、60-80min和100-120min低温处理的菌丝体中均有显著性变化,表明这一通路在草菇低温处理过程中表现活跃。基因表达趋势分析发现34个表达差异基因富集到显著表达趋势模型,基因共表达网络分析发现VVO_04066位于网络的核心地位,推测VVO_04066通过提高磷酸肌醇特异性磷脂酶C（PI-PLC）的胞内水平,促进糖蛋白和几丁质的合成,从而完成草菇细胞的低温胁迫应答。     

转基因检测标准的方法验证工作研究

转基因检测标准为转基因食品的有效标识、科学监管、推广应用提供重要的技术支撑。方法验证工作是指实验室通过一定的科学方法,验证上述转基因检测标准在实验室现有的人员、设备、场地环境等条件下是否可得到令人满意的结果。方法验证工作直接影响到标准的实施和应用,但现有的转基因检测标准的验证方法,大部分只提供了方法验证的定义,缺乏具体的操作方案。从验证工作的仪器设备、试剂及标准物质、技术验证参数、环境要求等关键要素进行讨论,提出相应的验证工作建议,旨在为农业转基因实验室开展方法验证提供详细的技术指导,并为我国转基因标准体系的应用推广提供参考。     

草菇耐低温突变菌株Vtlt-1和原始菌株V23转录组差异的研究

为了培育草菇耐低温菌株与解析其耐低温的分子机制,采用紫外诱变的方法,选育出耐低温草菇菌株Vtlt-1,并利用表达谱芯片技术,比较突变菌株Vtlt-1与原始菌株V23的表达差异基因,筛选差异显著基因后利用GO（gene ontology）功能注释和KEGG（kyoto encyclopedia of genes and genomes）通路富集等方法分析,结果发现与V23相比Vtlt-1表达显著差异基因共有1 600个,其中704个基因上调表达,896个基因下调表达。针对差异基因的GO功能分类结果发现：生物学过程方面,差异基因主要分布在金属离子结合、氧化还原过程、碳水化合物的代谢与核酸的结合。细胞组分方面主要与细胞核相关;分子功能中,氧化还原活性以及解旋酶活性,依赖于ATP 的解旋酶活性、DNA指导的RNA聚合酶活性。KEGG注释结果发现差异表达基因主要富集在氨基酸与氮类物质的代谢、脂肪酸与生物碱的合成这两方面,此外还富集到核糖体的生物合成、细胞色素P450、RNA聚合酶、硫和氨基酸的代谢、核酸的修复等通路。这些结果为解析草菇耐低温机制提供分子依据和理论基础。     

不同产地大蝉草的ITS鉴定及氨基酸和核苷成分比较

采用ITS方法对来自安徽省六安市霍山县、浙江省杭州市西湖区天竺山、浙江省台州市临海市、江苏省溧阳市平桥镇平桥山、江苏省句容市磨盘山和福建省三明市三元区中村乡6个地区的疑似蝉花样品进行分子鉴定,结果均为大蝉草Cordyceps cicadae,即蝉花。采用氨基酸自动分析仪测定其含量,由高到低依次是：浙江杭州市天竺山、浙江台州市临海、江苏溧阳市平桥山、江苏句容市磨盘山、安徽六安市霍山县和福建三明市三元。使用高效液相色谱对6个产地的蝉花的核苷进行测定,结果表明江苏平桥蝉花的N-6-(2-羟乙基)腺苷含量最高,杭州天竺山蝉花黄嘌呤和胞嘧啶含量最低。     

高岭土颗粒涂布对中国梨喀木虱寄主选择、产卵的影响及应用效果

为探索可替代化学药剂防治中国梨喀木虱的措施,开展了高岭土颗粒涂布对其寄主选择、产卵影响及应用效果的研究。分别采用3.5%高岭土水溶液、清水对梨休眠枝和当年生枝叶进行喷雾涂布处理,于24、48、72、96 h监测选择条件下成虫分布情况,于96 h记录选择和非选择条件下各枝条上的卵量。采用高岭土水溶液对梨苗均匀喷雾涂布,通过被害叶率、单叶若虫量、虫龄指数、为害指数对应用效果进行评价。研究结果显示,在选择条件下,经高岭土涂布的枝条上成虫数量明显少于对照,高岭土涂布的枝条上冬型成虫数量在96 h时最低(0.5头/枝),96 h时着卵量(1.83头/枝)显著低于对照(30.83头/枝);高岭土涂布的枝叶上夏型成虫在72 h时最低(1.17头/枝),96 h时着卵量(12.33头/枝)显著低于对照(242.5头/枝);在非选择条件下,冬型和夏型成虫在高岭土涂布的枝条上着卵量(2.83和15.17头/枝)分别显著低于对照(25.17和170.42头/枝);供试植株在接虫45 d后为害最严重,高岭土涂布的植株被害叶率(54.17%)、单叶若虫量(2.29头/叶)、虫龄指数(3.79)、为害指数(0.41)分别显著低于为对照植株(98.61%、11.72头/叶、4.13、0.95)。上述结果表明,高岭土涂布对中国梨喀木虱成虫的寄主选择具有驱避效果,对雌成虫的产卵具有抑制作用;高岭土涂布可限制中国梨喀木虱种群增长,降低危害水平。研究结果为中国梨喀木虱的综合治理提供了现实依据。     

草菇密码子偏好性分析

以草菇全基因组编码序列为研究对象,利用软件CodonW1.4.2分析草菇基因组密码子使用模式,确定了草菇的24个最优密码子。利用Create a condon usage table(CUSP)程序分析计算草菇密码子使用频率,并将它与人、酵母、拟南芥、小鼠、斑马鱼、果蝇6个代表性物种及灰盖鬼伞、双孢蘑菇、香菇、平菇4个食用菌进行比较。结果显示草菇密码子偏好性与人、酵母、拟南芥、小鼠、斑马鱼、果蝇和平菇都有较大的差异,与灰盖鬼伞、双孢蘑菇、香菇的密码子偏好性差异较小。利用软件SPSS16.0聚类分析表明密码子偏好性差异大小在一定程度上反映物种间的进化关系,可作为研究物种进化关系的参考。首次以食用菌全基因组为分析对象,解析草菇的密码子偏好性,并将其与其他生物进行比较,这些将为不同来源的外源基因在草菇中的异源表达提供重要参考。