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易错PCR是基因体外诱变的主要方法之一,是通过在PCR体系中添加Mn2+、提高Mg2+浓度和dCTP/dTTP浓度等措施达到基因诱变的目的。【目的和方法】本研究在不添加Mn2+、不调整其它任何PCR成分的情况下,通过降低dATP浓度的底物不平衡作用,对洋葱抗菌蛋白基因Ace-AMP1和苏云金芽胞杆菌毒蛋白(Bt)基因cry1A(c)进行了PCR诱变。【结果】结果表明:随着dATP浓度的降低,序列变异率和碱基突变率均呈升高趋势。当dTTP/dCTP/dGTP∶dATP在20∶1-40∶1时,碱基突变率介于1.4%-1.8%之间,序列变异率介于77.8%-100%之间。【讨论和结论】该方法简化了常规易错PCR诱变中的条件优化过程,简单实用。降低dATP浓度的诱变方法主要引起AT→GC的变异,适用于提高靶基因GC含量的体外诱变。本研究降低单一底物浓度的诱变方法可以提高诱变基因的AT或GC含量,是对易错PCR诱变方法的拓展。 相似文献
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1 植物名称 大豆 (Ｇｌｙｃｉｎｅｍａｘ)品种Ｋｕｎｉｔ 2。2 材料类别 未成熟种子芽。3 培养条件 大豆未成熟种子芽成苗培养基 :(1 )ＭＳ 6 ＢＡ 2ｍｇ·Ｌ-1(单位下同 ) ＫＴ 1 ＮＡＡ 0 .2。幼苗生长培养基 :(2 )ＨＢＷ培养基 (详见河北农业科学 ,第 3卷第 2期 2 相似文献
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