| 一种降低dATP用量的简单易错PCR方法 |
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| 引用本文： | 高义平,赵和,吕孟雨,孙果忠,杨学举,王海波.一种降低dATP用量的简单易错PCR方法[J].微生物学报,2014,54(1):97-103. |
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| 作者姓名： | 高义平 赵和 吕孟雨 孙果忠 杨学举 王海波 |
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| 作者单位： | 河北省农林科学院遗传生理研究所，河北省植物转基因中心，河北石家庄050051;河北省农林科学院遗传生理研究所，河北省植物转基因中心，河北石家庄050051;河北省农林科学院遗传生理研究所，河北省植物转基因中心，河北石家庄050051;河北省农林科学院遗传生理研究所，河北省植物转基因中心，河北石家庄050051;河北农业大学农学院，河北保定071000;河北省农林科学院遗传生理研究所，河北省植物转基因中心，河北石家庄050051 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(30270855) |
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| 摘 要： | 易错PCR是基因体外诱变的主要方法之一,是通过在PCR体系中添加Mn2+、提高Mg2+浓度和dCTP/dTTP浓度等措施达到基因诱变的目的。【目的和方法】本研究在不添加Mn2+、不调整其它任何PCR成分的情况下,通过降低dATP浓度的底物不平衡作用,对洋葱抗菌蛋白基因Ace-AMP1和苏云金芽胞杆菌毒蛋白(Bt)基因cry1A(c)进行了PCR诱变。【结果】结果表明:随着dATP浓度的降低,序列变异率和碱基突变率均呈升高趋势。当dTTP/dCTP/dGTP∶dATP在20∶1-40∶1时,碱基突变率介于1.4%-1.8%之间,序列变异率介于77.8%-100%之间。【讨论和结论】该方法简化了常规易错PCR诱变中的条件优化过程,简单实用。降低dATP浓度的诱变方法主要引起AT→GC的变异,适用于提高靶基因GC含量的体外诱变。本研究降低单一底物浓度的诱变方法可以提高诱变基因的AT或GC含量,是对易错PCR诱变方法的拓展。
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| 关 键 词： | 易错PCR 体外诱变 碱基突变 序列变异 洋葱抗菌蛋白基因 Bt基因 |
| 收稿时间： | 2013/4/29 0:00:00 |
| 修稿时间： | 7/1/2013 12:00:00 AM |
A simple error-prone PCR method through dATP reduction |
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| Yiping Gao,He Zhao,Mengyu Lv,Guozhong Sun,Xueju Yang and Haibo Wang.A simple error-prone PCR method through dATP reduction[J].Acta Microbiologica Sinica,2014,54(1):97-103. |
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| Authors: | Yiping Gao He Zhao Mengyu Lv Guozhong Sun Xueju Yang and Haibo Wang |
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| Institution: | Yiping Gao;He Zhao;Mengyu Lv;Guozhong Sun;Xueju Yang;Haibo Wang;Plant Genetic Engineering Center of Hebei Province,Institute of Genetics and Physiology,Hebei Academy of Agricultural and Forestry Sciences;College of Agriculture,Agricultural University of Hebei; |
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| Abstract: | |
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