鲍曼不动杆菌整合子介导耐药机制的初步研究

【摘 要】 目的 研究整合子参与鲍曼不动杆菌耐药的分子机制。结果 收集2008年1月至2011年12月瑞安市中医院临床分离的200株鲍曼不动杆菌,采用K-B法进行体外药敏试验,采用聚合酶链式反应进行整合子整合酶基因的检测;整合子可变区扩增、克隆、测序,分析整合子基因结构。结果 59.0%的医院感染鲍曼不动杆菌Ⅰ类整合子阳性,未检测出Ⅱ、Ⅲ类整合子;编码对氨基糖苷类、磺胺类抗菌药物和氯霉素耐药的基因;整合子阳性组多药耐药菌均明显高于阴性组。结论 Ⅰ类整合子在医院感染鲍曼不动杆菌中广泛分布,可通过质粒在不同菌属间水平传播,在耐药基因传播中起重要作用,应引起临床足够的重视。     

EF4影响线粒体氧化磷酸化并调控膀胱癌细胞增殖及迁移

延伸因子4(EF4)是一种非传统的线粒体延伸因子,参与调控线粒体蛋白质合成过程.在本研究中,我们进一步探索了其在膀胱癌中的作用机制.通过检测EF4在膀胱癌及邻近正常组织中的表达,发现EF4在膀胱癌患者肿瘤组织中异常升高,并在T分期较高的肿瘤中高表达.随后,通过在HTB-9和T-24膀胱癌细胞中敲低EF4的表达,进一步探索了EF4在膀胱癌发生及发展中的作用.研究结果表明,通过RNAi敲低EF4表达不仅可以抑制膀胱癌细胞HTB-9和T-24在体外的增殖和集落形成,还显著降低了其迁移能力,这一结果主要归因于下调EF4表达阻碍了线粒体DNA编码的呼吸链复合物亚基的翻译,影响呼吸链复合物的组装,并最终导致线粒体氧化磷酸化功能障碍.以上结果表明EF4通过维持线粒体重要复合物的翻译而影响膀胱癌细胞的细胞增殖迁移及膀胱癌发生发展,并提示EF4可能是治疗膀胱癌的潜在目标分子.     

临床分离肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合子的结构与功能

为了探索细菌多重耐药性的产生和播散的分子机制, 文章对2002～2007年间179株临床分离的肺炎克雷伯菌进行耐药性、I类整合子可变区基因盒结构以及基因盒携带的耐药性基因进行分段克隆和耐药性功能测定。结果显示：65.9%(118/179)的肺炎克雷伯菌表现出对至少两种以上的抗生素(主要为β-内酰胺类、氨基糖苷类和喹诺酮类抗菌药物)的耐药性; 36.3%(65/179)的菌株检出单条或者双条I类整合子基因盒条带; 对整合子阳性组与阴性组的耐药率进行比较发现, 除氨基糖苷类、喹诺酮类和复方新诺明等药物的耐药性存在显著性差异(P<0.01)外, 其余药物的差异不显著; 共发现15种耐药基因构成形式的整合子基因盒, 其中以dfrA17-aadA5最为多见, 实验证明整合子可由接合转移耐药性质粒携带; 对整合子基因盒(dhfr17-orfF-aadA2)分段克隆的耐药性功能研究发现, 3个克隆重组子(pET28a-dhfr17、pET28a-dhfr17-orfF和pET28a-dhfr17-orfF-aadA2)对复方新诺明的抗性(MIC值)均为256 µg/mL, 重组子pET28a-dhfr17-orfF与重组子pET28a-dhfr17对链霉素的抗性无明显区别, 和受体菌一样MIC值均为8 µg/mL, 而pET28a-dhfr17-orfF-aadA2对链霉素的抗性则明显提高, MIC值为256 µg/mL。结果表明, I类整合子在肺炎克雷伯菌中较常见, 携带氨基糖苷类和甲氧苄啶类的耐药基因盒在数量上占优势, 且整合子携带的耐药基因具有耐药性功能, 位于可水平转移耐药性质粒的耐药性基因相关的整合子对病原菌耐药性播散具有重要意义。 目的基因     

肺炎克雷伯菌blaCARB-2基因的分布及结构分析

为探讨β-内酰胺酶基因在临床分离肺炎克雷伯菌的分布及其相关可移动遗传元件的结构,本文利用基因组测序、PCR、分子克隆、接合转移和基因组学分析等方法,在对240株临床分离的肺炎克雷伯菌进行混合基因组测序的基础上,着重研究了bla_CARB-2等耐药性基因相关可移动遗传元件的结构及其在肺炎克雷伯菌基因组的定位,克隆获得耐药性质粒携带的若干耐药性基因并测定了它们的功能。结果显示,在240株肺炎克雷伯菌中检出11种β-内酰胺酶基因,其中1株肺炎克雷伯菌(KP1276)被检出bla_CARB-2基因,阳性率为0.42% (1/240);bla_CARB-2位于一个大小为182,450 bp的可接合转移质粒(pKP1276-182),pKP1276-182共编码222个基因,包含7个耐药性基因,分别是bla_CARB-2、bla_KLUC、aadA1、aadA2、cmlA1、dfrA1和sul2。bla_CARB-2是首次在肺炎克雷伯菌中被检出,且bla_CARB-2与其他3个耐药性基因一起构成一个新型结构的1型整合子(int-bla_CARB-2-aadA2-cmlA1-aadA1);对其中的3个耐药性基因bla_CARB-2、aadA2和CmlA1进行了分子克隆和耐药性测定,结果显示它们对相应药物都具有一定的耐药性, 其中bla_CARB-2对青霉素类β-内酰胺药物具有较高的耐药性。本研究结果表明,bla_CARB-2基因已经在肺炎克雷伯菌中出现,其由1型整合子携带编码位于一个可接合转移的质粒上,bla_CARB-2基因有可能在相同及不同种属肠杆菌之间进行水平转移,引起耐药性播散。