EGFRvⅢ胞外区基因重组腺病毒的构建及单域抗体的制备北大核心CSCD

本研究旨在构建能够表达人表皮生长因子EGFRvⅢ胞外区基因的重组腺病毒,并通过免疫骆驼构建噬菌体单域抗体库,筛选和制备EGFRvⅢ胞外区特异性单域抗体并对其进行鉴定。从人前列腺癌细胞系PC-3细胞中提取总RNA,反转录为cDNA,以cDNA为模板扩增EGFRvⅢ胞外区基因,并连接pAdTrack-CMV质粒载体,转化含有pAdEasy-1的大肠杆菌(Escherichia coli)BJ5183感受态细胞,获得同源重组质粒转染HEK293A细胞,得到表达EGFRvⅢ胞外区蛋白的重组腺病毒。利用重组腺病毒免疫双峰驼,构建EGFRvⅢ胞外区特异性噬菌体单域抗体库,并以EGFRvⅢ蛋白为筛选抗原,对其进行筛选,对筛选得到的单域抗体进行诱导表达、纯化及鉴定。结果表明获得了表达EGFRvⅢ胞外区基因的重组腺病毒。构建得到的EGFRvⅢ特异性噬菌体单域抗体库的库容为1.4×109;经过3轮富集和筛选,通过噬菌体ELISA筛选出31个与EGFRvⅢ胞外区蛋白结合的阳性克隆,并对OD450值较高的重组单域抗体E14进行了表达和纯化。经ELISA鉴定,重组单域抗体E14可与EGFRvⅢ胞外区蛋白产生抗原抗体结合反应,具有较高的亲和力。说明制备的EGFRvⅢ特异性噬菌体单域抗体库具有较高的库容和多样性,且筛选得到的单域抗体具有较高的抗原活性和免疫学反应性,为今后以EGFRvⅢ为靶点的恶性肿瘤的诊断和治疗提供新的实验依据。     

丙泊酚和依托咪酯混合液持续泵注在无痛胃肠镜麻醉中的应用

目的:探讨丙泊酚和依托咪酯混合液持续泵注在无痛胃肠镜麻醉中的应用效果。方法:2013年9月到2015年2月选择在我院进行无痛胃肠镜检查患者120例,根据随机数字表法分为治疗组60例与对照组60例,对照组给予丙泊酚辅助持续泵注麻醉,治疗组给予丙泊酚和依托咪酯混合液辅助持续泵注麻醉。结果:所有患者都完成检查,两组MAP与HR值在给药后2 min与给药前比较差异都有统计学意义(P0.05),在组间相比较无显著性差异(P0.05),其余时间点的上述值在组内与组间比较均无显著性差异(P0.05)。治疗组的诱导时间与离院时间都明显少于对照组(P0.05),对比两组的检查时间及苏醒时间,无显著性差异(P0.05)。治疗组检查后1天内出现的恶心、呕吐、头晕等并发症发生情况明显少于对照组(P0.05)。结论:丙泊酚和依托咪酯混合液持续泵注在无痛胃肠镜麻醉中的应用对于患者的血流动力学影响小,能促进麻醉效果的提高,减少不良反应的发生,值得推广应用。