| EGFRvⅢ胞外区基因重组腺病毒的构建及单域抗体的制备北大核心CSCD |
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| 引用本文： | 张慧敏,徐嘉奇,程艺,付山,刘艳龙,胡宇靖,杜雅楠,包福祥.EGFRvⅢ胞外区基因重组腺病毒的构建及单域抗体的制备北大核心CSCD[J].生物工程学报,2022,38(9):3551-3562. |
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| 作者姓名： | 张慧敏 徐嘉奇 程艺 付山 刘艳龙 胡宇靖 杜雅楠 包福祥 |
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| 作者单位： | 内蒙古农业大学 兽医学院, 内蒙古 呼和浩特 010018;内蒙古农业大学 兽医学院, 内蒙古 呼和浩特 010018;内蒙古农业大学 农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室, 内蒙古 呼和浩特 010018 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（81660297）；内蒙古农业大学兽医学院青年人才创新基金（2015QNJJ01） |
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| 摘 要： | 本研究旨在构建能够表达人表皮生长因子EGFRvⅢ胞外区基因的重组腺病毒,并通过免疫骆驼构建噬菌体单域抗体库,筛选和制备EGFRvⅢ胞外区特异性单域抗体并对其进行鉴定。从人前列腺癌细胞系PC-3细胞中提取总RNA,反转录为cDNA,以cDNA为模板扩增EGFRvⅢ胞外区基因,并连接pAdTrack-CMV质粒载体,转化含有pAdEasy-1的大肠杆菌(Escherichia coli)BJ5183感受态细胞,获得同源重组质粒转染HEK293A细胞,得到表达EGFRvⅢ胞外区蛋白的重组腺病毒。利用重组腺病毒免疫双峰驼,构建EGFRvⅢ胞外区特异性噬菌体单域抗体库,并以EGFRvⅢ蛋白为筛选抗原,对其进行筛选,对筛选得到的单域抗体进行诱导表达、纯化及鉴定。结果表明获得了表达EGFRvⅢ胞外区基因的重组腺病毒。构建得到的EGFRvⅢ特异性噬菌体单域抗体库的库容为1.4×109;经过3轮富集和筛选,通过噬菌体ELISA筛选出31个与EGFRvⅢ胞外区蛋白结合的阳性克隆,并对OD450值较高的重组单域抗体E14进行了表达和纯化。经ELISA鉴定,重组单域抗体E14可与EGFRvⅢ胞外区蛋白产生抗原抗体结合反应,具有较高的亲和力。说明制备的EGFRvⅢ特异性噬菌体单域抗体库具有较高的库容和多样性,且筛选得到的单域抗体具有较高的抗原活性和免疫学反应性,为今后以EGFRvⅢ为靶点的恶性肿瘤的诊断和治疗提供新的实验依据。
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| 关 键 词： | EGFRvⅢ EGFRvⅢ胞外区蛋白 重组腺病毒 单域抗体 抗体库 |
| 收稿时间： | 2022/2/18 0:00:00 |
Construction of recombinant adenovirus expressing EGFRvIII extracellular domain gene and preparation of single domain antibody |
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| ZHANG Huimin,XU Jiaqi,CHENG Yi,FU Shan,LIU Yanlong,HU Yujing,DU Yanan,BAO Fuxiang.Construction of recombinant adenovirus expressing EGFRvIII extracellular domain gene and preparation of single domain antibody[J].Chinese Journal of Biotechnology,2022,38(9):3551-3562. |
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| Authors: | ZHANG Huimin XU Jiaqi CHENG Yi FU Shan LIU Yanlong HU Yujing DU Yanan BAO Fuxiang |
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| Institution: | College of Veterinary Medicine, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, Inner Mongolia, China;College of Veterinary Medicine, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, Inner Mongolia, China;Key Laboratory of Clinical Diagnosis and Treatment Techniques for Animal Disease (LDTA), Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Inner Mongolia Agricultural University, Huhhot 010018, Inner Mongolia, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | EGFRvIII EGFRvIII extracellular domain recombinant adenovirus single domain antibody antibody library |
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