不稳定EGFP细胞模型的构建及其在基因编辑体系评价中的应用*

目的:为了更好地评价基因编辑效率,满足高通量筛选应用中快速、高效的检测要求,在细胞上建立一个原位检测方法具有重要的意义。通过检测荧光蛋白信号强度的变化可以评价CRISPR系统在细胞中的基因编辑情况,然而这一方法的效率受限于荧光蛋白较长的半衰期。方法:将鸟氨酸脱羧酶降解结构域(含PEST序列)与EGFP融合,通过慢病毒系统感染HEK-293T细胞,获得了表达单拷贝、EGFP-PEST报告基因的稳转细胞系。结果:与EGFP相比,EGFP-PEST在细胞内的降解速度明显加快,荧光水平在4 h内显著降低。利用该模型比较了3种商品化脂质体介导的CRISPR/Cas9基因编辑效率,能够在2~4 d实现定性和定量评价。结论:这一模型能够快速、灵敏地指示基因编辑效果,可以用于不同CRISPR系统或新递送工具的高通量筛选和评价。     

田菁蛋白鱼饲料的研究

田菁蛋白鱼饲料含部份蛋白水解物,有促摄食怍用。在养鱼试验中,取代豆饼,鱼产量提高了11.2％,盈余增加15.4％,经济效益较为显著。     

从田菁胶工业下脚料生产田菁蛋白胨的研究——[Ⅰ]田菁蛋白胨化学成份的研究

本文首次研究了田菁蛋白胨一般化学成份、氨基酸组份、肽链平均长度、微量元素、维生素以及红外、紫外光谱等。本文还将田菁蛋白胨氨基酸、红外光谱等和英国大豆蛋白胨作了比较。研究结果附图表于后。     

大豆生理活性物质的最新研究动向

大豆自古以来被作为“营养的宝库”,最近除被作为营养源之外,由于具有种种生理活性作为食品而倍受关注。研究报告也逐年增加。大豆含有20％的油和40％的蛋白,具有相当多的用途。现已弄清,大豆油及蛋白质除具有作为食品营养源的特性外,还具有生理机能。大豆中所含有的微量成分,(0.1～5％),对人体具有种种生理机能。经查阅CA,有关大豆的报道文章逐年在增加。这些报道,占CA所载文献的0.36％。以下分别对大豆的各成分以生理机能为中心作以介绍:     

济元阳口服液主要药效实验研究

以济元阳口服液7g/kg、14g/kg灌胃,使小鼠性器官、副性器官重量显著增加,去势大鼠副性器官亦有增加;小鼠附睾精子数量增加,精子活率提高,并能对抗环磷酰胺所致精子数量与活力下降,雄性小鼠及去势大鼠交配能力均有增强;肾阳虚小鼠体重、胸腺指数上升,自由活动、游泳耐力及耐寒能力均有所增强,以上实验结果表明,济元阳口服液有补肾壮阳、生精长力之功效。     

蜂花粉的开发及其破壁技术

花粉富含氨基酸、蛋白质、糖类、微量元素及生物活性物质（如酶类、黄酮类、核酸、有机酸等）。它的高营养、纯天然受到世界各国医药界和食品界的高度重视。蜂花粉在我国医药保健方面的应用早在神农本草经即有记载,其后历代医家也多有应用。如唐代本草学家苏恭认为,松花...     

蛇毒类凝血酶安克洛在毕赤酵母中的表达

目的:利用毕赤酵母表达具有生物学活性的蛇毒类凝血酶安克洛。方法:根据已知的天然安克洛的氨基酸序列,结合酵母偏好密码子,设计并合成了安克洛基因序列,将其克隆至表达载体pPIC9中,得到表达质粒pPIC9/Ancrod,电转至毕赤酵母GS115(His-)菌株感受态中,通过表达筛选获得工程菌株。采用5L发酵罐对工程菌进行发酵,表达安克洛。在诱导表达阶段,补加甲醇-山梨醇混合碳源。经疏水柱、肝素亲和柱和阳离子柱三步分离纯化得到重组安克洛,并鉴定其体外生物学活性。结果:重组安克洛表观相对分子质量为43000～48000,其糖基化不均匀,去糖基后蛋白肽链的相对分子质量约29000。重组安克洛被证明具有降解并凝固牛纤维蛋白原的活性,其比活力与天然安克洛相近。结论:采用毕赤酵母表达系统表达并获得有生物学活性的重组安克洛,为大规模生产打下了基础。     

田菁蛋白胨饲料的研究

前言蛋白质危机是世界四大危机之一,随着蛋白质生产与需求间的矛盾越来越突出,对蛋白质资源开发利用的科学研究也越来越活跃,人们急于寻求新的途径来开辟食用蛋白资源。在我国,突出问题是动物蛋白远远不足,这就必须大力发展畜牧业生产,以植物蛋白换取动物蛋白。因此开发利用饲料蛋白资源无疑具有十分紧迫的意义。近年来,田菁胶在石油开采和矿山爆破等工业中广泛应用,其下脚料亦随之大量增加。据朱荣誉等人(1987)分析,田菁胶下脚料粗蛋白含量约在30～50%之间,氨蒸酸组份与大     

重组巴曲酶在毕赤酵母中的高效表达

以毕赤酵母为表达系统,建立生产重组巴曲酶的技术工艺路线。通过递归式PCR的方法,人工合成了巴曲酶基因,将其插入pPIC9表达质粒中,转化至毕赤酵母GS115(his4),筛选出的表达株经甲醇诱导,表达了重组巴曲酶,并得以纯化。从每升发酵液中可纯化得到10mg重组巴曲酶,其比活为238NIHunits/mg,分子量为30.55kD。重组巴曲酶在体外可使纤维蛋白凝固,在体内缩短小鼠出血时间。为开发重组的蛇毒类凝血酶止血剂打下了基础。     

田菁蛋白胨的研究

田菁蛋白胨的氨基酸含量及水解程度低于鱼蛋白胨和英国大豆蛋白胨。田菁蛋白胨在代替动物蛋白胨用于庆大霉素的发酵试验中,发酵单位提高17.6％(P<0.01);田菁蛋白胨可以完全取代动物蛋白胨用于红霉素和洁霉素发酵,部份取代动物蛋白胨用于四环素发酵,发酵单位提高9.2％。