SARS冠状病毒结构蛋白在血清学诊断中潜在应用价值的比较

为了确定特异的SARS抗体检测抗原,比较了SARS冠状病毒(SARS-CoV)主要结构蛋白与SARS患者血清的反应性。从SARS死亡患者的肺组织提取的总RNA为模板,用RT-PCR技术分别扩增S、N、M和E4种结构蛋白基因,对3种S截短突变体和N、M、E的重组蛋白在大肠杆菌中进行表达。以表达的蛋白为抗原,应用Western blot跟踪检测11例SARS患者血清54份。结果显示：SARS—CoV的重组N蛋白和s蛋白有很强的抗原性,s蛋白的3个区段的抗原性强弱存在差异,S3抗原性强于S1和s2;在患病第1周、2周、3周及3周以上,N蛋白和s3蛋白抗体检出率分别为40％、65。2％、100％、100％和40％、61％、76.2％、100％;提示SARS-CoV重组N蛋白和S3蛋白在SARS的血清学诊断中有一定的应用价值。     

诸葛菜精细胞特异蛋白多肽的研究

匀浆破碎诸葛菜(Orychophragmus violaceus(L.)O.F.Schulz)花粉,经10μm尼龙膜过滤,蔗糖密度梯度离心,分得样品层、样品与30％蔗糖中间层、30％蔗糖层、30％与40％蔗糖中间层、富含精细胞层等5层。酚法抽提蛋白质,经双向电泳,富含精细胞层含有249个蛋白多肽点,样品层有204个蛋白多肽点,样品与30％蔗糖中间层有190个蛋白多肽点,30％蔗糖层有244个蛋白多肽点,30％与40％蔗糖中间层含有167个蛋白多肽点。分析比较这些双向电泳图谱可知,至少有18种蛋白多肽是精细胞所特有的,且大多数特异蛋白的分子量在60kD以上。     

嗜热和常温蛋白模式识别的研究

采用主成分分析、偏最小二乘回归和BP神经网络三种方法对嗜热和常温蛋白进行模式识别。结果表明,三种方法对训练集拟合的平均正确率分别为92％、95％和98％,对测试集进行预测的平均正确率分别为60％、72.5％和72.5％,对嗜热蛋白预测正确率最高为75％,常温蛋白最高为85％。构建了数学模型并对其生物学意义进行了解释,建立了一种基于序列的识别嗜热和常温蛋白的新方法。     

神经再生过程中脊髓运动神经元β管蛋白基因表达的变化

损伤大鼠右侧坐骨神经后,SDS—PAGE电泳分析双侧腹角细胞中蛋白含量变化,发现损伤侧的管蛋白相对含量较对照侧增加了17％—121％。损伤后3—14d损伤侧腹角运动神经元中β管蛋白mRNA的原位杂交信号增强了27％—70％,β管蛋白mRNA的Northern杂交分析也显示基因表达的增强。     

检测尿液中纤维结合蛋白可以帮助发现膀胱癌

据西班牙研究人员说,测量尿液中的纤维结合蛋白可能帮助诊断膀胱癌。研究者发现,纤维结合蛋白使用25．6mg／L的界值、纤维结合蛋白与肌酐之比使用36．9的界值对膀胱癌分别有78％和75％的敏感性,特异性都是80％。尿细胞学的敏感性则只有55％,但特异性达100％。研究者还发现纤维结合蛋白、纤维结合蛋白与肌酐之比根据肿瘤的大小和阶段而显著不同,他们认为这些结果可能对制订治疗决策有意义。     

胆管癌组织中层粘连蛋白及67KDa层粘连蛋白受体的表达及其临床意义

目的 探讨层粘连蛋白及67KDa层粘连蛋白受体的表达与胆管癌临床病理学行为的关系。方法 应用S-P免疫组化法对52例人胆管癌组织中层粘连蛋白及67KDa层粘连蛋白受体的表达水平进行研究。结果 层粘连蛋白及67KDa层粘连蛋白受体的高表达与胆管癌淋巴结转移呈明显相关,层粘连蛋白及67KDa层粘连蛋白受体阳性肿瘤淋巴结转移率（83％,55％）明显高于层粘连蛋白及67KDa层粘连蛋白受体阴性肿瘤（15％,20％,P〈0．05）,且层粘连蛋白及67KDa层粘连蛋白受体的表达与胆管癌组织学类型、分化程度亦存在明显相关（P〈0．05）。结论 层粘连蛋白及67KDa层粘连蛋白受体的表达在胆管癌淋巴结转移中起协同作用。     

饲料中土豆蛋白替代鱼粉对虹鳟摄食率、消化率和生长的影响

通过生长试验探讨了饲料中土豆蛋白浓缩物替代鱼粉后对虹鳟摄食率,消化率,生长和饲料利用的影响,对照饲料全部鱼粉为蛋白源,其它饲料分别含土豆蛋白２．２％,５．６％,８．９％和１１．１％,另一饲料含５．６％,土豆蛋白和１．７％蛋氨酸,在１２℃下饲养４周,试验结果表明,随着饲料中土豆蛋白使用比例的增加,虹鳟的摄食率下降,饲料的干物质,蛋白和灰分的表现消化率上升,脂肪的表现消化率无显著影响,当饲料中含５．６     

苜蓿愈伤组织中的盐胁迫蛋白

0.5％NaCl抑制愈伤组织生长,处理后期(第21天和28天检测)24kD蛋白含量明显增加。1.0％,2.0％和3.0％NaCl处理的愈伤组织不生长,未检出24kD蛋白增加,但36～42kD蛋白大量增加,并且有随处理的盐浓度增高而增加的趋势。 在1.0％NaCl适应愈伤组织(简称S-1)中24kD蛋白含量明显增加,而36～42 kD蛋白含量下降到对照水平。~(35)S-Met体内标记表明,增加的24kD蛋白是新合成的。S-1回到无盐5代后,仍保持提高的耐盐性和24kD蛋白含量。24kD蛋白含量的增加不受甘露醇胁迫的诱导。初步离心分离的细胞亚组分表明,24kD蛋白主要位于胞质和细胞器膜。在烟草S-1细胞中也发现24kD蛋白含量增加。     

HPLC法分析乳清蛋白对糖尿病模型小鼠血浆氨基酸组分的影响

为寻求有效的氨基酸分离方法并探讨乳清蛋白对2型糖尿病防治的作用机制,采用HPLC法分析乳清蛋白中氨基酸组分及含量;分别以0％、10％、20％和40％的乳清蛋白(WP)灌胃1型、2型糖尿病模型组、正常组小鼠,4周后观察各组血浆氨基酸的变化.乳清蛋白中亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸分别占氨基酸总量的14.40％、5.93％和5....     

红花籽蛋白

红花(Carthamus tinctorius)籽含油35～40％,蛋白质15～20％,种壳占35～45％。人们正在尝试用红花籽蛋白和蛋白分离物作为食品与饲料,但是,由于它们颜色欠佳并带苦味,故在应用方面受到很大影响。如果脱去红花蛋白的颜色和苦味,并加入适量赖氨酸,红花蛋白便可成为良好的营养食品     

3种纯化重组禽流感病毒NS1抗原方法的比较

目的：摸索出最佳分离纯化和复性重组禽流感病毒NS1抗原的方法,得到高纯度的重组蛋白。方法：将重组质粒pET32a—NS1转染大肠杆菌BL21（DE3）后获得表达,分别以尿素变性、复性,Ni—NTA His．Bind Resin亲和,以及脱氧胆酸钠-N-十二烷基肌氨酸钠（DOC—SKL）洗涤溶解等3种纯化方法从表达产物包涵体中分离纯化NS1蛋白,并进行比较研究。结果：原核表达得到相对分子质量约45000的目的蛋白;3种纯化方法均能分离和纯化出NS1重组蛋白,其中尿素纯化的蛋白纯度为50％～60％,Ni—NTA His．Bind Resin亲和纯化的蛋白纯度为80％-90％,DOC-SKL纯化的蛋白纯度达95％以上;Western blot检测表明,复性后的纯化蛋白具有良好的生物学活性。结论：应用十二烷基肌氨酸钠洗涤纯化是最佳的纯化NS1蛋白的方法,所获得的蛋白可作为包被ELISA的抗原。     

α－天冬氨酰二肽酶基因的高表达和产物回收

建了α－天冬氨酰二肽酶基因(pepE)与载体pBV220连接的高表达重组质粒(pBVPEP,4337bp)。转化大肠杆菌后,目的基因表达为两种形式的产物,即细胞质中可溶性蛋白(～75％)和包含体蛋白,共占细菌总蛋白的30％左右。SDS－PAGE分析温敏诱导的表达蛋白,可以观察到约27kDa的高表达蛋白条带,与提纯的酶带一致。用不同于以往的萃取包含体蛋白的方法,回收了包含体中95％以上的表达蛋白。     

家蚕蛹期雌雄生殖腺蛋白质双向电泳比较分析

分析家蚕Bombyx mori雌雄生殖腺细胞蛋白质,有利于发现性别分化相关的功能蛋白质,探讨生殖腺发育相关基因的表达调控机理。本研究利用蛋白质双向凝胶电泳和图像分析技术,分析家蚕蛹期第2天的雌雄生殖腺细胞蛋白质。结果表明: 在雄蚕生殖腺蛋白质电泳图谱中共检测到435个蛋白斑点,其中特异性蛋白斑点73个,占总蛋白斑点数的16.8％;雌蚕生殖腺的电泳图谱中有417个蛋白斑点,其中特异性蛋白斑点55个,占总蛋白斑点数的13.2％。雌雄能匹配的蛋白斑点有362对,匹配率达85.0％。     

实验藏酋猴日粮蛋白质营养水平研究

目的本试验旨在研究不同蛋白水平对实验藏酋猴生长性能和血液生化指标的影响并确定幼年实验藏酋猴的蛋白营养需要量。方法选用15只幼年实验藏酋猴随机分为5个处理组,每个处理3个重复,分别饲喂蛋白水平为11．1％、16．1％、20．5％、24．5％和29．8％的日粮,试验期90d。结果随着日粮中蛋白水平的提高,实验藏酋猴的增重、血清白蛋白、球蛋白、天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶和尿素氮含量显著增加（P〈0．05）,而血清总蛋白、甘油三酯、γ-谷氨酰胺转移酶和碱性磷酸酶无显著差异。应用折线法确定幼年实验藏酋猴的蛋白营养需要量为23．69％。结论日粮蛋白水平对实验藏酋猴生长性能有显著影响,从生物学和经济学角度考虑,初步认为在本试验条件下,未成年实验藏酋猴日粮蛋白水平以23．69％最合适。     

离子交换色谱法对大肠杆菌表达的人重组骨形态发生蛋白-7的纯化

重组大肠杆菌高量表达重组人骨形态发生蛋白-7(rhBMP-7),每升培养液约得到湿菌体3g,其中目的蛋白约占菌体总蛋白量的40％。裂解离心,用低浓度变性剂洗涤初步纯化包涵体,上清中无目的蛋白损失;将包涵体溶解于高浓度变性剂溶液中,目的蛋白纯度提高到60％;然后在不同条件下用离子交换色谱法对变性状态下的蛋白质进行纯化,绝大部分杂蛋白被除去,目的蛋白纯度达95％以上;改变条件,可以减少rhBMP-7损失;用Western blot对目的蛋白进行特异性鉴定。     

多管藻R—藻红蛋白的激光光敏作用对体外培养的肿瘤细胞生存…

用１００μｇ／ｍｌ藻红蛋白联合激光处理８１１３人口腔上皮癌细胞,ＭＴＴ比色法测定癌细胞存活率。实验表明,先用藻红蛋白处理再经波长为４８８ｎｍ,２５．６Ｊ／ｃｍ＾２氩离子激光辐照,细胞存活率为２５％;而单用藻红蛋白,单用激光组分别为４３％和１０７％。结果证明,藻红蛋白的光敏作用对体外培养的肿瘤细胞具有较强的杀伤作用。     

多管藻R-藻红蛋白的激光光敏作用对体外培养的肿瘤细胞生存率的影响

用１００μｇ／ｍｌ藻红蛋白联合激光处理８１１３人口腔上皮癌细胞,ＭＴＴ比色法测定癌细胞存活率。实验表明,先用藻红蛋白处理再经波长为４８８ｎｍ,２５．６Ｊ／ｃｍ２氩离子激光辐照,细胞存活率为２５％;而单用藻红蛋白,单用激光组分别为４３％和１０７％。结果证明,藻红蛋白的光敏作用对体外培养的肿瘤细胞具有较强的杀伤作用。     

α－天冬氨酰二肽酶基因的高表达和产物回收

构建了α天冬氨酰二肽酶基因（ｐｅｐＥ）与载体ｐＢＶ２２０连接的高表达重组质粒（ｐＢＶＰＥＰ,４３３７ｂｐ）。转化大肠杆菌后,目的基因表达为两种形式的产物,即细胞质中可溶性蛋白（～７５％）和包含体蛋白,共占细菌总蛋白的３０％左右。ＳＤＳＰＡＧＥ分析温敏诱导的表达蛋白,可以观察到约２７ｋＤａ的高表达蛋白条带,与提纯的酶带一致。用不同于以往的萃取包含体蛋白的方法,回收了包含体中９５％以上的表达蛋白。     

HCV E蛋白基因的变异及变异的意义

目的分析不同来源HCV的不同亚型（不同型别之间的不同亚型）及同一亚型之间E蛋白基因的变异及变异的意义。方法使用GenBank公开发表的不同来源HCV的不同亚型及同一亚型之间全基因序列为材料,用CLustalw2软件分析序列之间的同源性。结果不同亚型之间E蛋白基因变异达到了70．5％（E1蛋白基因）和59．8％（E2蛋白基因）;不同亚型的E2蛋白基因有两个高度变异区,相同的亚型之间只有一个高变区;伺一亚型之间E蛋白基因的变异率为11．8％-16．8％（E1蛋白基因）和18．4～29．9％（E2蛋白基因）。结论根据相同亚型之间E蛋白基因的变异较小的特点,可以利用不同亚型病毒的抗原表位发展多价混合多肽疫苗或多基因混合疫苗,可能会对多种不同亚型病毒的感染起到免疫保护作用。     

丝素蛋白/羟基磷灰石复合物对磷酸钙骨水泥性能的影响

目的：磷酸钙骨水泥（Calcium phosphate cement,CPC）以其诸多优点正得到了越来越多的应用,但其较差的力学性能表现也限制了它的使用范围。本研究目的在于改善磷酸钙骨水泥的力学性能,同时评估改性后的磷酸钙骨水泥的其他性能。方法：通过丝素蛋白（Silk fibroin,SF）的矿化自组装方法制备丝素蛋白／羟基磷灰石复合物（silk fibroin/hydroxyapitite composite, SF/HA）。按照1％、2％、3％、4％的质量分数加入磷酸钙骨水泥中,与磷酸钙骨水泥组对比。比较内容包括力学强度、抗渍散性能及细胞毒性。结果：以丝素蛋白溶液为液相组的磷酸钙骨水泥强度大约为35MPa。随后随着添加丝素蛋白／羟基磷灰石复合物的质量分数从1％增至3％,磷酸钙骨水泥的强度逐渐增加（P〈0．05）,最高约至45MPa。而当丝素蛋白／羟基磷灰石的质量分数达到4％时,磷酸钙骨水泥的强度较质量分数3％组小幅度下降至43MPa（P〈0．05）。以丝素蛋白溶液作为液相时,磷酸钙骨水泥的抗溃散能力也得到了加强。在MTT法测定细胞活力的对照实验中,无论是加入丝素蛋白溶液或丝素蛋白／羟基磷灰石复合物,都未观察到细胞毒性。结论：在磷酸钙骨水泥中加入3％质量分数的丝素蛋白／羟基磷灰石复合物,能显著提高磷酸钙骨水泥的抗压强度。而丝素蛋白溶液作为液相可改善磷酸钙骨水泥的抗溃散能力。同时,丝素蛋白和丝素蛋白／羟基磷灰石复合物都不表现出细胞毒性。更理想的力学强度和更强的抗溃散能力,大大扩展了磷酸钙骨水泥的应用范围。