小鼠骨髓间充质干细胞通过miR-130b调控上皮钠通道的机制研究

该研究旨在探讨小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)通过miR-130b对上皮钠通道(epithelial sodium channel,ENaC)的影响。将分离与培养的小鼠BMSCs接种到Transwell小室中,然后与H441细胞进行共培养。利用CCK-8试剂盒检测BMSCs对H441细胞生存能力的影响;采用Western blot技术检测BMSCs对共培养的H441细胞中γ-ENaC蛋白水平的影响;qRT-PCR技术检测与BMSCs共培养的H441细胞中miR-130b表达情况,然后将此microRNA转染到普通培养的H441细胞中,在蛋白水平进一步验证其对H441细胞中γ-ENaC的影响。实验结果表明,BMSCs能够增强H441细胞的生存能力;同时BMSCs能分别增加共培养的H441细胞中γ-ENaC的蛋白水平以及miR-130b的转录水平;Western blot实验进一步证实,miR-130b转染至H441细胞后能够增加其γ-ENaC的蛋白表达。由此我们推测,BMSCs能够增强H441细胞的生存能力并且可能通过miR-130b发挥其对γ-ENaC的蛋白水平调控作用。     

无赖氨酸激酶4在小鼠气管上皮细胞液体转运中的作用

该研究探讨了无赖氨酸激酶4(with no lysine kinase 4, WNK4)对于小鼠气管上皮细胞液体转运中的调节作用。在原代培养的小鼠气管上皮细胞中,应用siRNA特异性沉默WNK4基因,半定量PCR和Western blot实验验证沉默效率;随后应用尤斯灌流装置和Western blot实验记录该激酶的低表达对小鼠气管上皮细胞的短路电流及钠离子通道α-亚基蛋白表达水平的影响。半定量PCR和Western blot结果显示,该研究选用的siRNA序列可以沉默WNK4的表达。尤斯灌流和Western blot结果显示,沉默该激酶后,小鼠气管上皮细胞的阿米洛利敏感性电流和钠离子通道α-亚基蛋白表达明显增加。该研究表明,降低WNK4基因表达能增加小鼠气管上皮细胞的上皮钠离子通道α-亚基蛋白表达,促进钠离子转运,此过程可能参与相关水肿性肺疾患的修复。     

间充质干细胞外泌体对肺脏上皮钠离子转运的调控作用研究

该文讨论了小鼠骨髓间充质干细胞来源的外泌体(bone mesenchymal stem cell-exosome,BMSC-exo)对肺损伤引起的肺泡上皮钠离子转运障碍的调控。从BMSCs的条件培养基中分离外泌体,利用透射电镜技术对其形态结构以及大小进行了鉴定;对培养的经典肺上皮细胞系H441细胞分别给予脂多糖或外泌体处理,应用qRT-PCR和Western blot技术检测了H441细胞中钠离子通道在mRNA和蛋白水平的表达情况。此外,研究结果表明,LPS处理的H441细胞中miR-199a-3p的表达明显降低;与单独应用LPS组相比,浓度为20μg/mL的外泌体处理组中miR-199a-3p的表达显著性升高;和阴性对照组(NC)相比,转染miR-199a-3p mimic的H441细胞中α-、γ-ENaC的表达明显升高,而和inhibitor NC组相比,miR-199a-3p inhibitor组的α-、γ-ENaC的表达则明显降低。网站预测结果显示,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是miR-199a-3p的靶蛋白,miR-199a-3p mimic组的mTOR蛋白的表达明显低于NC组;miR-199a-3p inhibitor组和inhibitor NC组相比,mTOR的表达显著性升高。以上结果表明,BMSC-exo可能经miR-199a-3p参与mTOR通路调节肺泡上皮细胞中钠离子通道的表达来促进肺脏上皮离子转运,进而可能促进病理条件下的肺脏液体清除,参与临床急性肺损伤等相关水肿性肺疾病的治疗。