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大鼠肝tRNA^Ile基因的克隆与体外转录 总被引:1,自引:1,他引:0
采用PCR扩增出大鼠肝tRNA^Ile基因,构建了重组质粒pGWIW,并用T7RNA聚合酶/启动子系统对其进行了体外表达。经过对转录产物片段大小及运用Northermblot鉴定,证明了获得了不含修饰核苷酸的大鼠肝tRNA^Ile。生物学活性检测显示:合成基因体外转录产物氨基酰经活性是天然tRNA的40%,提示修饰核苷酸在哺乳动物Ile-tRNA合成酶的识别过程中起重要作用。 相似文献
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用T7 RNA聚合酶体外转录合成大鼠肝tRNAIle 总被引:1,自引:0,他引:1
采用PCR技术从rec-M13mp18中扩增出120 bp的大鼠肝tRNAIle合成基因片段,经限制性内切酶BstNⅠ酶切后作为模板,利用T7 RNA聚合酶在体外无细胞体系转录由T7启动子带动的大鼠肝tRNAIle基因,生成不含修饰碱基的tRNAIle,并对体外转录反应条件进行了优化,回收的tRNA产量可达DNA模板量的40倍. 相似文献
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利用T7RNA聚合酶/启动子表达系统在大肠杆菌JM109(DE3)中表达化学合成的大鼠肝tRNA^Ile基因,经酚抽提,DEAE-52离子交换柱层极及PLC层析,分离纯化大鼠肝tRNA^Ile,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和Noprthern-blot鉴定表明,大鼠肝tRNA^Ile基因成功地获得表达,氨酰化活性检测表明,纯化后,每1A260(40μg)的tRNA^Ile可负载约650pmol的Ile 相似文献
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采用PCR技术从rec M1 3mp1 8中扩增出 1 2 0bp的大鼠肝tRNAIle合成基因片段 ,经限制性内切酶BstNⅠ酶切后作为模板 ,利用T7RNA聚合酶在体外无细胞体系转录由T7启动子带动的大鼠肝tRNAIle基因 ,生成不含修饰碱基的tRNAIle,并对体外转录反应条件进行了优化 ,回收的tRNA产量可达DNA模板量的 4 0倍 相似文献
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采用PCR扩增出大鼠肝tRNAIle基因,构建了重组质粒pGWIW,并用T7RNA聚合酶/启动子系统对其进行了体外表达.经过对转录产物片段大小及运用Northernblot鉴定,证明获得了不含修饰核苷酸的大鼠肝tRNAIle生物学活性检测显示:合成基因体外转录产物氨基酰化活性是天然tRNA的40%,提示修饰核苷酸在哺乳动物Ile-tRNA合成酶的识别过程中起重要作用 相似文献
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利用T7RNA聚合酶/启动子表达系统在大肠杆菌JM109(DE3)中表达化学合成的大鼠肝tRNAⅡe基因.经酚抽提、DEAE-52离子交换柱层析及HPLC层析,分离纯化大鼠肝tRNAⅡe.变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和Northern-blot鉴定表明,大鼠肝tRNAⅡe基因成功地获得表达.氨酸化活性检测表明:纯化后,每1A260单位(40μg)的tRNAⅡe可负载约650pmol的Ⅱe,纯度为54.2%.说明从大肠杆菌中分离纯化出具有一定生物学活性,一定纯度的合成基因表达产物. 相似文献
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