人肿瘤坏死因子α基因穿梭表达载体的构建和在鱼腥藻7120中的表达

报道了人肿瘤坏死因子α(hTNFα)基因穿梭表达载体的构建及其在丝状体蓝藻鱼腥藻 712 0中的表达和鉴定结果 .将质粒pRL rhTNF上hTNFα的cDNA连于pRL 43 9质粒上的PpsbA启动子下游 ,得到中间载体pRL TC .进一步与穿梭质粒pDC 8重组 ,得到可在大肠杆菌和蓝藻中均可表达的穿梭表达载体pDC TNF .pRL rhTNF ,pRL TC和pDC TNF三者在大肠杆菌中的表达量分别为 11.8% ,16 9%和 15 .0 % .通过三亲接合转移将pDC TNF引入鱼腥藻 712 0中并获稳定遗传的转基因株 .从转基因的鱼腥藻 712 0中检测到pDC TNF质粒的存在 ,且在和TNFα的cDNA探针进行的Southern杂交中呈阳性反应 .抽提转基因藻的蛋白样品进行检测 ,在Western印迹中和TNFα单克隆抗体呈阳性反应 .采用TNF对L92 9细胞的细胞毒性方法 ,证明转基因藻粗提液中 ,TNF确有细胞毒活性 .     

一种载样简单的多重可视化PCR微芯片

在核酸检测领域急需一种能够经济、快速、操作简便且同时检测多个靶标的新技术。常规多重PCR能够同时扩增多个靶标,但由于在一个试管中引物间的相互作用和竞争,重数往往受到限制。本研究设计了一种操作简单的多重PCR芯片,可以同时进行54个靶标的扩增。芯片结构简单,一条微通道将正下方平行排列的多个微孔连接在一起,微通道只留加样口和出样口。同时整个微通道呈疏水状态,微孔呈亲水状态。将不同的引物对和低溶点琼脂糖提前固定于不同的微孔中,通过一次加入PCR mix,并加入矿物油推动PCR mix进入到每个微腔室中,同时微孔也被矿物油相互隔离避免交叉反应。加样后将芯片放置于平板PCR仪上进行扩增,在整个反应过程中低溶点琼脂糖呈液态,反应结束后凝固成固体,便可引入核酸染料进行染色,最后利用自制小型的紫外照射仪上进行可视化检测和拍照记录。利用此平台成功实现了对7种非常重要和常用的转基因作物靶标的并行检测,结果显示此平台具有较高的灵活性和特异性。此技术经过进一步优化可应用于包括转基因检测在内的多重核酸检测领域。     

Construction of shuttle, expression vector of human tumor necrosis factor alpha (hTNF-α) gene and its expression in a cyanobacterium, Anabaena sp. PCC 7120

The construction of the shuttle, expression vector of human tumor necrosis factor alpha (hTNF-a) gene and its expression in a cyanobacterium Anabaena sp. PCC 7120 was reported. The 700-bp hTNF cDNA fragments have been recovered from plasmid pRL-rhTNF, then inserted downstream of the promoter PpsbA in the plasmid pRL439. The resultant intermediary plasmid pRL-TC has further been combined with the shuttle vector pDC-8 to get the shuttle, expression vector pDC-TNF. The expression of the rhTNF gene in Escherichia coli has been analyzed by SDS-PAGE and thin-layer scanning, and the results show that the expressed TNF protein with these two vectors is 16.9 percent (pRL-TC) and 15.0 percent (pDC-TNF) of the total proteins in the cells, respectively, while the expression level of TNF gene in plasmid pRL-rhTNF is only 11.8 percent. Combined with the participation of the conjugal and helper plasmids, pDC-TNF has been introduced into Anabaena sp PCC 7120 by triparental conjugative transfer, and the stable transgenic     

人巨细胞病毒疫苗研究进展

人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus, HC-MV)是一类在自然界普遍存在的具有严格种属特异性的病毒,属β疱疹病毒亚科。Zsofia Gyulai等[1]对HCMV感染作了流行病学调查,发现体内抗病毒体液免疫反应主要针对gB;而细胞免疫反应主要针对pp65、pp150。根据HCMV感染的特点和机制,以上     

高压氧在治疗糖尿病视网膜病变中的应用进展

糖尿病视网膜病变是糖尿病最常见、最主要的微血管并发症之一,其高发病率、高致盲率特征严重威胁着人类的健康和生存质量。长期的高糖状态导致视网膜缺血缺氧是糖尿病视网膜病变的主要发病原因。控制高血糖和改善组织缺氧无疑是防治糖尿病微血管病变的有效方法之一。而高压氧治疗是许多急慢性疾病的首选或辅助治疗方法。已有大量证据表明,高压氧治疗对视网膜静脉阻塞及黄斑囊样水肿、缺血性视神经病变、中心性浆液性脉络膜视网膜病变等眼病安全有效。本文就高压氧在糖尿病视网膜病变中的应用进行综述和讨论。     

维持性血液透析患者高钾血症的相关因素分析及环硅酸锆钠散辅助干预效果研究

摘要 目的：分析维持性血液透析（MHD）患者高钾血症的相关因素,并观察环硅酸锆钠散辅助干预效果。方法：纳入我院2020年3月~2022年3月期间收治的MHD患者134例,通过本院病历系统收集患者资料,以是否出现高钾血症作为分组标准：分为血钾正常组（n=49）和高钾血症组（n=85）,多因素Logistic回归分析MHD患者发生高钾血症的相关因素。采用随机数字表法将高钾血症组患者分为对照组（接受MHD治疗）和观察组（MHD治疗基础上接受环硅酸锆钠散干预,比较两组高钾血症干预前后相关指标和不良反应发生情况。结果：134例MHD患者中血钾正常49例（36.57%）纳入血钾正常组,高钾血症85例（63.43%）纳入高钾血症组。单因素分析结果显示,MHD患者高钾血症与甲状旁腺激素（PTH）、合并糖尿病、既往高钾血症史、透析前血钾检验次数、超滤量、血流量、血红蛋白（Hb）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、尿素、尿酸、血肌酐、血钠、白蛋白、血磷有关（P<0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示：尿素偏高、血钠偏高、血磷偏高、白蛋白偏高、Hb偏高、合并糖尿病、透析前血钾检验次数偏少是MHD患者高钾血症发生的危险因素（P<0.05）。对照组与观察组干预后血钾均降低,且观察组低于对照组（P<0.05）。对照组、观察组不良反应发生率组间对比无统计学差异（P>0.05）。结论：MHD患者高钾血症的相关因素主要有尿素、血钠、血磷、白蛋白、Hb、合并糖尿病、透析前血钾检验次数。应用环硅酸锆钠散辅助干预高钾血症患者,可有效改善其血钾水平,安全有效。     

聚球藻7942高效泌氨突变种的获得及其泌氨,谷氨酰胺合成酶活性,光合和生

将含有Ａｎａｂａｅｎａｓｐ．ＰＣ７１２０反义ｇｌｎＡ基因片段的穿梭表达质粒ｐＤＣ－ＡＴＧＳ转化单细胞蓝藻聚球藻Ｓｙｎｅ－ｃｈｏｃｏｃｃｕｓｓｐ．ＰＣＣ７９４２,通过同源重组,外源ＤＮＡ定位整合到染色体上。经过抗菌素筛选,获得一种高效泌氨的Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓｓｐ．７９４２突变种。