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| 人肿瘤坏死因子α基因穿梭表达载体的构建和在鱼腥藻7120中的表达 | |
| 引用本文： | 刘凤龙,张宏斌,施定基,商之狄,林晨,邵宁,彭国宏,张雪艳,张海霞,吴锦银,王捷,徐旭东,江悦华,钟泽璞,赵树进,吴昊,曾呈奎.人肿瘤坏死因子α基因穿梭表达载体的构建和在鱼腥藻7120中的表达[J].中国科学C辑,1999,29(2):217. |
| 作者姓名： | 刘凤龙 张宏斌 施定基 商之狄 林晨 邵宁 彭国宏 张雪艳 张海霞 吴锦银 王捷 徐旭东 江悦华 钟泽璞 赵树进 吴昊 曾呈奎 |
| 作者单位： | 1. 中国科学院植物研究所,北京,100093 2. 广州军区广州总医院医学实验科,广州,510010 3. 中国科学技术大学生物系93级,合肥,230027 4. 中国医学科学院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室,北京,100021 5. 中国科学院海洋研究所实验海洋生物学开放实验室,青岛,266071 6. 美国密执安州立大学国家植物学实验室,EastLansing,Michigan48824-1312 |
| 摘 要： | 报道了人肿瘤坏死因子α(hTNFα)基因穿梭表达载体的构建及其在丝状体蓝藻鱼腥藻 712 0中的表达和鉴定结果 .将质粒pRL rhTNF上hTNFα的cDNA连于pRL 43 9质粒上的PpsbA启动子下游 ,得到中间载体pRL TC .进一步与穿梭质粒pDC 8重组 ,得到可在大肠杆菌和蓝藻中均可表达的穿梭表达载体pDC TNF .pRL rhTNF ,pRL TC和pDC TNF三者在大肠杆菌中的表达量分别为 11.8% ,16 9%和 15 .0 % .通过三亲接合转移将pDC TNF引入鱼腥藻 712 0中并获稳定遗传的转基因株 .从转基因的鱼腥藻 712 0中检测到pDC TNF质粒的存在 ,且在和TNFα的cDNA探针进行的Southern杂交中呈阳性反应 .抽提转基因藻的蛋白样品进行检测 ,在Western印迹中和TNFα单克隆抗体呈阳性反应 .采用TNF对L92 9细胞的细胞毒性方法 ,证明转基因藻粗提液中 ,TNF确有细胞毒活性 . |
| 关 键 词： | 人肿瘤坏死因子α 鱼腥藻7120 穿梭表达载体 三亲接合转移 Southern和Western 印迹细胞毒活性 |
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