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禽呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 总被引:3,自引:0,他引:3
禽呼肠孤病毒(Avian Reovirus,ARV)属呼肠孤病毒科的禽群,广泛分布于鸡群中,能从健康鸡和许多发病鸡体内分离到。已知与ARV有关的疾病有病毒性关节炎、溃疡性肠炎、慢性呼吸道病、心肝病损、肉鸡矮小综合症、蓝翅病等。ARV的存在给养鸡业造成了严重的危害。本试验利用淋巴细胞杂交瘤技术在国内首次建立了8株分泌ARV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,并对ARV4个毒株的抗原性进行了比较。 选用ARV的FDO株,在鸡胚原代成纤维细胞上增殖,免疫用和检测用病毒分别经差速离心和密度梯度离心纯化。按常规方法对6~8周龄BALB/c小鼠进行长程和短程(脾内直接注射)免疫,免疫鼠脾脏细胞与Sp2/0细胞胞以5:1的比例进行融合,克隆化培养和筛选后,从两次融合的70个阳性孔中获得C61、C74、 相似文献
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一株新城疫病毒新强毒株(NL)的分离鉴定及F基因序列测定 总被引:3,自引:0,他引:3
1996年5月以来,1我国各地鸡群暴发鸡新城疫,其发病特征是常规疫苗免疫无效。为研究此病毒的特征,对从华东某地分离的新城疫病毒毒株(NL株)进行了生物学研究。利用RT-PCR技术扩增出NL株融合蛋白基因(F基因)全序列,并测序。结果表明,NL株平均致鸡胚死亡时间最短的,其尿囊液中病毒滴度可达2^9,表明病毒繁殖速度快。F基因测序结果表明,NL株为一强毒株,与现今国外已发表的NDV株F基因同源性在8 相似文献
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马立克氏病病毒(Marek’sdiseasevirus,MDV)是一种能诱导鸡淋巴组织增生或淋巴肿瘤的细胞结合性疱疹病毒,由此而引起的马立克氏病(Marek’sdisease,MD)也是迄今为止唯一可以利用疫苗进行有效控制的肿瘤性疾病。鉴于此,作为研... 相似文献
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表达鸡传染性支气管炎病毒JS/95/03株S1蛋白的重组杆状病毒构建 总被引:3,自引:0,他引:3
The recombinant baculovirus expressing S1 glycoprotein of nephropathogenic strain JS/95/03 of infectious bronchitis virus was generated by using the Bac-to-Bac baculovirus expression system.The BamH I-Sal Ⅰ fragment containing S1 gene from the recombinant plasmid pMDJS9503S1 was purified and cloned in frame into the baculovirus transposing vector pFASTBAC HTa under the polyhedrin gene promoter.The recombinant transposing plasmid pFASTJS9503S1 was screened and then transformed into Escherichia coli DH10BAC.The resulting recombinant bacmid rBacmidJS9503S1 was transfected into cells of the insect Spodoptera frugiperda(Sf9)and the recombinant baculoviruse rAcJS9503S1 was obtained.The lysates of cells infected with rAcJS9503S1 were analyzed by SDS-PAGE and the expressed product of S1 gene was detected by Western bloting and immunofluorescence assay(IFA).The results showed the recombinant baculovirus was fully capable of expressing S1 glycoprotein of JS/95/03.Maybe owing to the incomplete glycosylation in insect cells,the S1 gene product had a Mr of only 61000.In immunofluorescence test and Western blotting,the expressed product could react with polycolonal antibody against IBV M41 strain,indicating it possessed the antigenic properties specific for native S1 glycoprotein. 相似文献
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采用酸性茚三酮法测定了30株有益芽胞杆菌的赖氨酸产量,然后在不同的溶菌酶浓度下,对赖氨酸产量超过0.07g/L的21株菌进行原生质体转化质粒pUB110,测定原生质体形成率、原生质体再生率及转化频率,结果6103,6104,6120,6129四株菌的转化频率较高。然后,采用经典遗传学方法选育AEC抗性突变株,使赖氨酸积累提高。其中,B. licheniformis 6104诱变菌株610401能积累赖氨酸2.91 g/L,比出发菌株提高了17倍左右,转化率也提高了一个数量级。通过质粒的再转化试验及传代稳定性试验,进一步证实B.licheniformis 6104及其突变菌株610401是较好的受体菌,尤其是用于赖氨酸合成酶基因的表达。 相似文献
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有益芽孢杆菌受体菌研究 总被引:1,自引:0,他引:1
采用酸性茚三酮法测定了30株有益芽胞杆菌的赖氨酸产量,然后在不同的溶菌酶浓度下,对赖氨酸产量超过0.07g/L的21株菌进行原生质体转化质粒pUB110,测定原生质体形成率、原生质体再生率及转化频率,结果6103,6104,6120,6129四株菌的转化频率较高。最后,采用经典遗传学方法选育AEC抗性突变株,使赖氨酸积累提高。其中,B.licheniformis 6104诱变菌株610401能积累赖氨酸2.91g/L ,比出发菌株提高了17倍左右,转化率也提高了一个数量级。通过质粒的再转化试验及传代稳定性试验,进一步证实B.licheniformis 6104及其 突变菌株610401是较好的受体菌,尤其是用于赖氨酸合成酶基因的表达。 相似文献
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采用滤纸片抑菌圈法测定30株益生芽直菌对15种抗生素的敏感性。结果90%菌抗磺胺嘧啶,对其余抗生素大部分菌株敏感。用改良碱裂解法提取30株菌质粒,只有6129菌株含有一个大约4.3kb的质粒,质粒消除南粒与磺胺嘧啶抗性无关。 相似文献