重金属锌单克隆抗体的制备及鉴定

通过双功能螯合剂S-20-(4-异硫氰苄基)-二乙烯三胺五乙酸(p-SCN-Bn-DTPA)将锌离子(Zn2+)分别与载体蛋白匙孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)和牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)偶联.通过二喹啉甲酸(bicinchoninic acid,BCA)法测抗原蛋白浓度,对抗原、KLH和BSA分别进行紫外分光光度计扫描,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)进行定性鉴定,利用石墨炉原子吸收分光光度法检测抗原中Zn2+含量等,成功获得了免疫抗原Zn-DTPA-KLH和检测抗原Zn-DTPA-BSA、DTPA-BSA.用Zn-DTPA-KLH免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合,极限稀释法亚克隆,间接酶联免疫吸附法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)筛选,获得了1株稳定分泌抗重金属锌抗体的杂交瘤细胞株(Z1A5).Z1A5染色体数目在100以上,所分泌的抗体为IgM亚类,轻链为kappa型,腹水型抗体效价高达1∶51 200.本研究为锌离子残留免疫学检测方法的建立提供了物质及技术基础,对提高风险评估工作的效率和质量,保障食品安全有重要现实意义.     

抗重金属汞离子抗体的制备及鉴定

汞、镉、铅等重金属引起的环境污染已在世界范围内造成危害。快速、廉价地监测生境中重金属是减小其对人类及动物危害的先决条件。传统检测方法无法满足高通量的现场检测,建立更快速、更经济的免疫分析法检测汞离子是生产及经济发展的需要。本研究中,报道了汞特异性单克隆抗体的制备与筛选方法和结果。因Hg2+太小以至于不能引起免疫反应,所以用螯合剂(二乙烯三胺五乙酸,DTPA)将金属离子与载体蛋白(匙孔血蓝蛋白,KLH)连接起来。成功合成、鉴定汞复合物抗原后,免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合获得了稳定分泌抗体的杂交瘤细胞。用极限稀释法亚克隆,通过ELISA筛选,获得了2株稳定分泌抗汞离子抗体的细胞株(H2H5,H1H8)。小鼠腹腔注射1×107H2H5、H1H8细胞株制备腹水,腹水抗体效价都在1∶51200以上。经鉴定两株杂交瘤均为IgG1亚类,轻链为kappa型且分泌抗体稳定性较好。实验结果为汞离子残留免疫学检测方法的建立提供了技术基础,对提高风险评估工作的效率和质量,保障食品安全有重要现实意义。     

山东省烟草根际土壤真菌多样性研究

为了有助于研究烟草根际土壤真菌与根茎病害发生程度的相互关系,文中对采自山东省6个地区的122份烟草根际土壤样品进行了真菌的分离和培养,采用形态学方法进行鉴定,并分析了菌群的多样性组成。从山东烟草根际土壤中分离和鉴定出真菌22属79种,其中接合菌门4属6种,子囊菌门1属1种,无性型真菌17属72种。优势真菌种群为青霉属(Penicillium)、木霉属(Trichoderma)、镰孢菌属(Fusarium)和曲霉属(As-pergillus),所占分离真菌总菌数的比例分别为22.39%、13.62%、12.69%和9.88%。6个采样地区间真菌菌群的多样性水平存在差异,其中诸城地区的多样性指数(H′=2.066 6)、均匀度指数(J=0.689 8)和丰富度指数(R=3.730 1)均最高。     

马传染性贫血病毒白细胞弱毒疫苗株及其亲本毒驴强毒株前病毒基因组比较分析

为阐明马传染性贫血白细胞弱毒疫苗株(EIAVDLV)的致弱和免疫保护机理,对EIAVDLV121及其亲本驴强毒株(EIAVDV117)前病毒全基因组序列进行了测定,并结合准种理论,分析了EIAV疫苗致弱过程中基因组进化特点。利用LA-PCR技术对EIAVDV117和EIAVDLV121的前病毒基因组分两段进行扩增,分别获得4个和10个前病毒全基因组序列。EIAVDV117前病毒基因组平均为8236bp,G C含量38.0。EIAVDLV121前病毒基因组平均8249bp,G C含量37.3。两者的前病毒基因组平均差异率为2.8。其中S2、LTR和env基因差异较大,分别为4.1、3.9和3.1。此外,S2、S3和env推导的氨基酸的差异明显,分别为10.4、5.6和4.8(gp90为6.8)。EIAVDLV121各基因的异质性均显著高于EIAVDV117。研究发现体外培养的EIAVDLV121至少有5种类型的LTR混合存在。在gp90推导的氨基酸序列上,EIAVDV117比EIAVDLV121平均多2个N-糖基化位点,总数为19,其中3个为EIAVDV117特有。EIAVDLV121有1个疫苗株特有N-糖基化位点。研究结果为进一步探讨马传染性贫血弱毒疫苗生物学特性提供信息。     

青岛地区烟草白粉病病原

在青岛地区的温室和实验室中发现烟草白粉病,通过对病原形态特征、核糖体基因内转录间隔区序列分析以及致病性测定,将青岛地区烟草白粉病的病原确定为奥隆特高氏白粉菌Golovinomyces orontii,这是该病原在国内烟草上的首次报道。     

烟草根际土壤真菌多样性的研究

烟草土传病害发生普遍,危害严重。为深入了解烟草根际土壤真菌区系与土传病害间的相互关系,选取黑龙江、山东、广西和云南四省区的代表性烟田,开展了烟草根际土壤真菌多样性的研究。对采自上述四省区12个县市的224份烟草根际土壤样品进行了真菌的分离和培养,共分离获得1,278株真菌,通过形态学特征鉴定出真菌25属86种。其中接合菌门4属6种,子囊菌门1属1种,无性型真菌20属79种。通过分析发现,烟草根际土壤中的优势真菌种群及其菌株数量所占分离真菌总菌株数量的比例分别为：青霉属Penicillium 16.74%,木霉属Trichoderma 14.32%,镰孢菌属Fusarium 13.54%和曲霉属Aspergillus 11.50%。在12个采样地点中,山东诸城的多样性指数（H￠=2.0666）和均匀度指数（J=0.6898）最高,云南玉溪的丰富度指数（R=4.0687）最高。不同采样地点的烟草根际土壤真菌种群的相似性水平也存在差异,其中云南永胜和大理的烟草根际土壤真菌种群的相似性系数最高（Cj=0.9375）,山东沂水和云南玉溪间的相似性最低（Cj=0.5217）。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒BJBLZ株序列剖析

预测与分析HP-PRRSV BJBLZ株序列特点,为进一步该毒株的研究做准备.利用分子生物学软件及服务器,对HP-PRRSV BJBLZ株全序列及各结构蛋白的生化特性、溶解性和核定位信号等进行了分析,结果显示HP-PRRSV BJBLZ株至少可划分12个非结构蛋白和6个结构蛋白;同源性比较显示GP3和GP5蛋白变异性高,M和N蛋白保守.GP3、GP5和M蛋白糖基化位点与参考株有变化,GP2、GP4和N蛋白糖基化位点与所有参考株一致.服务器预测显示,N蛋白的碱性氨基酸比例明显高于其他蛋白,总平均亲水值明显低于其他蛋白;GP2、GP3和GP4蛋白不稳定,GP5、M和N蛋白稳定.6个结构蛋白预测不溶性概率均占66％以上,GP3不溶性概率最高.可以利用以上一些不同于以往各代表株的特点,为PRRS的诊断和防治进行进一步的研究.     

基层医院实施医师规范化培训的实践与思考

通过健全的组织制度管理、不断完善的培训方案,针对不同对象,实施多元化培训模式、差别培训,完成专业技术及临床决策能力培训。科学、规范的医师培训使其成为医院的优秀员工,认同医院文化,并在行动上与医院的目标保持一致。     

新甲型H1N1流感病毒的分子遗传进化分析

为了分析2009年新型A型H1N1流感病毒分子流行病学的特点,本文从NCBI上下载不同分离宿主的流感毒株各节段全基因序列应用分子生物学软件进行遗传演化分析,结果显示:新型A(H1N1)流感毒株与过去的人源A(H1N1)毒株相比差异较大,相对于此前的人源A(H1N1)流感毒株,HA出现了79个位点发生突变。其中14个是相对于所有来源A(H1N1)流感毒株的新突变位点,但有37个突变位点只能在猪源毒株中找到。究竟这一现象说明新型A(H1N1)流感毒株是猪、人源毒株的重组变异毒株,还是猪源H1N1感染人群后逐渐变异并适应人群的结果,还有待进一步研究。