猪生殖和呼吸综合征病毒B13株ORF7基因的克隆及在杆状病毒系统中的表达

利用单管RT－PCR方法扩增猪生殖和呼吸综合征病毒（PRRSV）分离株B13株包括ORF7基因的片段,并对其序列进行了测定,结果PRRSV分离株B13ORF7基因长度为384bp,编码128个氨基酸组成的15kD蛋白。与已发表的PRRSV LV株、VR－2332株进行同源性比较,发现核苷酸同源性分别为99.2%、59.4%;氨基酸同源性分别为98.4%、54.7%。。表明PRRSV分离株B13在基因结构上可能与LV株同属于欧洲亚群。同时构建了重组转移载体质粒pAcGHLT-B-ORF7,且该重组转移载体质粒与线性化苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（AcMNPV-SVI^-G)基因组DNA（baculo gold linearized baculovirus DNA）共转染草地夜蛾（Spodoptcra frugiperda,Sf9）细胞,得到重组病毒AcMNPV-OCC^--GST-6xHis-ORF7。在感染了重组病毒的Sf9细胞中检测到分子量为46kD的ORF7基因的GST融合蛋白表达产物,能被猪抗PRRSVB13株多克隆血清所特异识别。此结果为PRRS新型诊断抗原的研制奠定了基础。     

RNA甲醛琼脂糖凝胶电泳的优化及探讨

目的：优化RNA甲醛琼脂糖凝胶电泳条件。方法：对实验器材进行彻底的RNase灭活处理;在原有电泳过程的基础上,增加预电泳、缓冲液液面的处理和制胶过程中未加入溴化乙锭等优化过程。结果：优化后的电泳不仅能验证总RNA的完整性,而且能鉴定RNA的分子大小。结论：优化的RNA甲醛琼脂糖凝胶电泳法操作简单、省时、快速,RNA条带清晰、定位准确、无弥散及非特异条带。     

RNA甲醛琼脂糖凝胶电泳的优化及探讨

目的:优化RNA甲醛琼脂糖凝胶电泳条件。方法:对实验器材进行彻底的RNase灭活处理;在原有电泳过程的基础上,增加预电泳、缓冲液液面的处理和制胶过程中未加入溴化乙锭等优化过程。结果:优化后的电泳不仅能验证总RNA的完整性,而且能鉴定RNA的分子大小。结论:优化的RNA甲醛琼脂糖凝胶电泳法操作简单、省时、快速,RNA条带清晰、定位准确、无弥散及非特异条带。     

果梅不同成熟期品种花芽形态分化期的研究

用扫描电镜观察不同成熟期品种果梅芽生长,或,能获得清晰、完整的形态分化图象。广东连南县果梅在７月中下旬开始花芽分化,其中早熟品种（白粉梅）分化期较短,至１０月中下旬结束,约三个月;中、迟熟品种（软枝大粒梅和五月梅）分化期较长,至１２月中下旬,历时五个月。     

甲醇酵母表达系统高拷贝数整合型表达载体的构建

以甲醇酵母(Hansenula polymorpha)表达系统的Yip型表达载体pJF5-1为基础,通过引入宿主来源的一个rDNA随机顺序和由SV40早期启动子控制的G418抗性基因(neo)及对野生型标记基因Hpleu2启动子大部分上游序列的缺失,构建了一个高拷贝整合型表达载体pMIRH。有关转化、筛选和拷贝分析等试验结果表明,由pMIRH可产生含高拷贝数载体的转化子,并可通过由leu2+筛选和G418抗性筛选所组成的二级筛选方法富集这些含高拷贝数载体的转化子。有关完整DNA和消化DNA Southern杂交分析结果进一步表明,上述高拷贝数的载体以串联重复排列的方式整合于宿主基因组。     

猪生殖和呼吸综合征病毒B13株ORF7基因的克隆及在杆状病毒系统中的表达

利用单管RT-PCR方法扩增猪生殖和呼吸综合征病毒（PRRSV）分离株B     

副结核荧光PCR试剂盒研制与应用

采用TaqMan荧光标记探针技术原理, 建立副结核分枝杆菌特异的实时荧光PCR快速检测鉴定方法并组装形成临床诊断试剂盒。试剂盒提供荧光PCR与样品核酸提取试剂, 检测全程包括样品处理可在1 d内完成。特异性试验结果表明, 试剂盒对8株副结核分枝杆菌标准菌株的检测均呈典型阳性反应, 对牛分枝杆菌、结核分枝杆菌等其它12种分枝杆菌标准菌株以及大肠杆菌、肺炎链球菌等多种常见微生物均呈阴性反应。试剂盒检测灵敏度可达单个菌细胞、15个基因拷贝, 比常规PCR检测灵敏度提高100倍。对每份添加50~100个菌细胞的20份阴性牛奶样品进行检测, 均呈阳性反应。重复性试验结果显示, 试剂盒组内变异系数为1.41%, 组间变异系数为2.42%。采用所研制的副结核分枝杆菌荧光PCR试剂盒对来自广东地区7个奶牛场的250份牛奶样品和粪便样品、来自10个养猪场的143份猪血清样品, 以及3批次进口食蟹猴共100份血清样品进行检测, 检出牛奶样品中副结核分枝杆菌阳性率为7.7%, 牛粪样品中阳性率为3.7%, 猪血清样品中阳性率为8.2%, 进口猴血清样品中阳性率为3.0%。