实时定量PCR法检测生物技术药物中宿主基因组DNA残留

利用基于SYBR GreenⅠ荧光染料的实时定量PCR方法检测酵母表达生物技术药物产品中宿主DNA残留量。该方法检测灵敏度可达到1.0 fg/μL, DNA浓度在1.0 fg/μL～1.0 ng/μL范围内线性良好,其标准曲线的相关系数为099以上。应用该方法对3批不同实验样本进行测定,宿主DNA残留量分别为8.635×105 fg/μL、6.265×102 fg/μL和1436 fg/μL 。实验表明该方法操作简便、灵敏度高,可用于生物技术药物产品中酵母DNA残留的定量测定。     

利用FRET技术研究Hepcidin 和Fpn 相互作用

铁是生命必需的微量元素,ferroportin(Fpn)是小肠吸收细胞铁释放的重要蛋白。新近发现肝脏分泌的抗菌多肽 hepcidin 具有调节肠铁吸收的重要作用,但目前尚缺少Fpn和hepcidin发生作用的实验依据。应用荧光共振能量转移技术(fluorescence resonance energy transfer ,FRET)对hepcidin和Fpn之间的作用关系进行了深入研究。首先进行了hepcidin-CF P融合蛋白表达载体的构建及表达鉴定;然后对含YFP,Fpn-YFP基因动物细胞表达载体的构建、表达和FRET检测。实验结果证实hepcidin和Fpn之间存在直接的相互作用,并发现两种蛋白发生相互作用后hepcidin也在细胞质中有分布。为临床治疗铁代谢紊乱性疾病提供了新的治疗策略和重要理论依据。     

中枢神经系统疾病治疗性抗体药物应用进展

单克隆抗体药物是一种新兴的治疗药物,具有高选择性,被用于多种疾病的治疗,如肿瘤、免疫疾病等,也可以用于中枢神经系统疾病,如阿尔茨海默病、帕金森病、中风和脑肿瘤等。然而,因为血脑屏障低通透性,限制了抗体药物在中枢神经系统疾病治疗中的应用,在很多神经系统疾病临床试验中,抗体药物并没有取得预期效果。如今,人们利用血脑屏障上内源性转运蛋白介导,设计了可以通过血脑屏障的抗体药物。对通过血脑屏障治疗性抗体药物研发进展及其应用前景进行了综述。     

蛋白质药物糖基化工程化改造研究进展

多种哺乳和非哺乳动物的蛋白质表达系统已成功用于重组糖蛋白药物的生产。糖基化对于生物药品的研究开发至关重要,对生物药品的药效、半衰期及抗原性等产生重要影响。糖基化工程的目的是生产组分明晰、结构均一的N-和O-连接的糖基化蛋白药物。N-糖基化改造的相关研究显示,利用哺乳动物和非哺乳动物表达系统可以表达均匀的N-聚糖重组糖蛋白。与N-糖基化改造相比, O-糖基化的改造研究尚处于起步阶段。首个糖基化工程单克隆抗体已在美国和日本获得上市批准。综述了重组蛋白表达系统的糖基化工程化改造的研究进展,包括蛋白质药物的 N-糖基化改造和O-糖基化改造的最新进展,以期为蛋白质药物的糖基化工程改造研究提供参考。     

化学发光检测试剂鲁米诺的安全使用策略

鲁米诺是一种对于不可见血迹进行增强显示的试剂,是法医科学中最敏感的显色试剂之一,同时也可作为发光试剂应用于各种生物检测体系中。出于对安全与健康的担心,该试剂在英国和其他一些欧洲国家的使用一直受到限制。本文综述了有关鲁米诺试剂对于健康的影响的研究进展,分析显示只要采取适当的防护措施,在犯罪现场或在实验室使用鲁米诺试剂的安全风险可控。     

宿主细胞残留蛋白质对单克隆抗体药物质量影响及其质量控制

以单克隆抗体药物(monoclonal antibodies,m Abs)为代表的生物制品药物销售在不断扩大,并呈现持续上升势头,m Abs的使用为疾病治疗提供了新策略。随着m Abs使用量增大,对产品质量提出了更高要求,随着宿主细胞表达m Abs水平的不断提高,宿主细胞蛋白(host cell proteins,HCP)含量也随之增加,上下游生产工艺面临不断挑战。HCP所含蛋白质异常复杂,虽然一些HCP可能会被降解,但残留HCP仍会引起药物临床使用中的不良反应,从而影响药物的安全性和有效性。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunesorbent assays,ELISAs)是目前HCP检测的重要方法之一,ELISAs可以定量检测药物中总HCP含量,但存在局限性。对正在开发的包括LC-MS/MS在内的多种分析方法进行HCP检测,将为药物工艺过程开发和验证提供更多依据。讨论了以CHO(Chinese hamster ovary,中国仓鼠卵巢)细胞系为宿主的m Abs生产中,HCP的质量控制及检测分析方法的研究进展。     

大量Pichia pastoris酵母基因组DNA的提取

巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统是目前应用最广泛的外源基因表达系统之一,提取酵母基因组是研究酵母必需的方法之一.针对常用的几种毕赤酵母基因组DNA的制备方法进行比较,并对玻璃珠法进行改进.改良的玻璃珠法不但具有省时省力、操作简便且结果稳定的优,适合于大量DNA的提取.该方法的革新将对酵母重组子的PCR鉴定检测及表达产品DNA相关检测提供更高效稳定的保证,将成为酵母等类似微生物基因组DNA制备的首选方法.     

抗体药物糖化检测方法及其生物学功能研究进展

糖化是一个重要的蛋白质修饰过程,可能影响治疗性蛋白药物（如单克隆抗体药物）的生物活性及分子稳定性。许多研究表明糖化血红蛋白水平升高与心血管疾病及动脉粥样硬化有着密切关系。人体的血浆蛋白,如白蛋白、球蛋白、纤维蛋白和胶原蛋白也可能被糖化,进而形成AGEs,蛋白药物的生产、储存以及药物在体内循环过程中都可能发生糖化反应。综述了治疗性抗体药物糖化的原因、分析方法,以及糖化对抗体药物生物学功能的影响,以期为临床抗体药物的开发、优化及贮存条件研究提供参考。     

非免疫球蛋白配体药物应用进展

同抗体药物相比,非免疫球蛋白配体药物(Non-immunoglobulin scaffolds,非免蛋白配体药物)具有分子量小,不需要翻译后修饰,通常缺乏二硫键,并可进行直接的多聚化修饰等优点。最近几年,研发的非免蛋白配体药物种类就达到了二十余种,如Adhirons,Alphabodies,Centyrins,Pronectins,Repebodies,Affimers,和Obodies等,其中的139个非免疫球蛋白配体,可以特异靶向结合102种蛋白。这些非免疫球蛋白配体多用于癌症和炎症性疾病的治疗和诊断,其中有10多种非免疫球蛋白配体已经进入临床试验研究。最近,非免蛋白配体也被用于伴侣蛋白作结构解析研究,翻译后修饰的细胞内监控,或作为显微镜,流式细胞仪,Western印迹法等检测方法中抗体的替代品。     

抗体药物免疫原性评估的研究进展

抗体药物引发机体产生的非必要免疫反应,将影响药物的疗效和安全性。因此,有必要对处于不同研发阶段的抗体药物的免疫原性进行评估,包括上市后的监测。免疫原性评价是所有抗体药物研发过程中的关键环节,监管部门对抗体药物的免疫原性评估有严格要求,但是对于证据类型,数量和质量缺少统一标准,也缺少抗体药物免疫原性测定实验设计的指导文件或免疫原性比较的标准。新技术的出现促进了免疫原性评估的发展,免疫原性检出率也有了相应的提高,因此,只能进行“头对头”临床试验,才能对抗体药物的免疫原性进行评估。因此,研究机构,监管机构和临床医生都需要认识到免疫原性分析方法的变化。在这里,讨论了抗体药物免疫原性的相关因素,潜在的临床后果,评估免疫原性的监管指导变化,非临床和临床研究的免疫原性评估方法的发展,以及生物仿制药免疫原性评估需要特别注意的事项。