蔗糖—葡萄糖双功能酶传感器的研究

结合蔗糖转化酶酶管与葡萄糖氧化酶－葡萄糖变旋酶双酶电极构成一种新的蔗糖传感器。该传感器可以分别用于蔗糖及葡萄糖的测定。蔗糖经酶管作用产生α－Ｄ－葡萄糖,再用ＧＯＤ－ＭＵＴ双酶电极定糖。若是样品中蔗糖和葡萄糖共存,比较样品流经不同路径时传感器的响应值,可以排除葡萄糖对蔗糖测定的干扰。传感器的最适ｐＨ和温度范围分别为：５．０－６．５和３０－４０℃,在稳态法实验中,传感器的线性范围为：２．５×１０＾－４     

一种免受乙醇干扰的GOD的酶电极

将酶电极应用于发酵糖的测定时。与糖共存的乙醇常常会影响测糖的准确性,通过对葡萄糖氧化酶(GOD)电极的研究,探讨了乙醇对测糖酶电极测定影响,进而研制出抗干扰的GOD酶电极,若是GOD电极的酶膜通过夹心法制备．在乙醇含量为0．1％(V／V)时·即产生显著的影响,使测定结果偏大4．3%,且乙醇的影响随浓度的升高而增大,若用尼龙网固定GOD膜,GOD电极在测定20mmol／L和5mm01／L左右的葡萄糖溶液时,含量高达9％的乙醇仍未对测定产生显著的影响．表现出良好的不受乙醇干扰的特性,并且,该尼龙网GOD电极具有良好的重复性、稳定的响应活性及较长的保存期．     

测蔗糖复合酶电极的研究

采用酶电极流动注射分析系统(EFIA),由固定化酶膜包括蔗糖转化酶(INV),葡萄糖变旋酶(MuT)及葡萄糖氧化酶(GOD)与氧电极共同组成的复合酶电极用于蔗糖的快速测定。实验确定每张酶膜的最适酶量(Iu比)为lNV：MUT：GOD：72：48：2．4。酶经固定化后,INV与MUT的综合回收活力>42．9％。其最适pH为5．8—6．5。最适温度范围是35—45℃。动态法和稳态法测试的线性范围分别为：5×10^-4—10^-1和10-5—2×10^-3mol／L,响应时间分别<20s和<2 min。实验的重复性良好,变异系数<1．7％。用此酶电极测定以蔗糖为碳源的发酵液中的蔗糖含量,平均回收率达到98％。发酵液中的蔗糖分解产生的葡萄糖对本电极的干扰可通过平行运行的GOD电极来校正。连续使用的寿命至少为120h。比前年报道的14th有了显著的提高。酶膜显示了较好的保存稳定性(30天,保存于4℃蒸馏水中)和一定的抗热性(50℃,30min)。     

灵芝液体发酵条件的优化研究

通过单因素和正交试验,优化灵芝5760深层培养的营养需求与环境条件对灵芝菌丝体生物量及次生代谢产物发酵液多糖的作用。结果表明,适宜灵芝液体菌种培养和液体发酵的培养基配方为麦麸粉5%,黄豆饼粉3%,KH2PO40.10%,MgSO40.09%;适宜的环境条件为初始pH5.5,装液量32%,生物量最大时为第8～9d;适宜接种的种龄为6d,接种量为10%;发酵周期6d,搅拌转速150r/min,消沫剂添加量可为0.20%。从硒对灵芝5760菌丝体生长及深层发酵生物量的影响,灵芝5760富硒培养适宜浓度为100μg/mL;从加硒时间对生物量的作用,在菌龄适宜时期加入即第1d。     

药用植物富贵菜的研究现状与展望

富贵菜(Gynura divaricata DC.)是中国民间传统的药食兼用型多年生草本植物资源,具有清热、凉血、止痛、调节免疫、降血糖和抗肿瘤的功效。对富贵菜国内外研究进展进行了综述,内容涉及植物学特性、生态学特性、营养与保健、采后保鲜、栽培繁殖病虫害防治、功能化学成分及药理作用研究等方面。并在对其所存在的问题进行初步讨论的基础上,提出在加强种植资源遗传多样性研究与保护的同时,开展现在育种技术和栽培技术的研究,结合新兴生物技术和药理研究,开展富贵菜资源的综合运用。     

As_2O_3干预口腔鳞癌A431细胞EGFR表达的研究

目的：研究三氧化二砷（As2O3）对人口腔鳞癌A431细胞生长的抑制作用,探讨其抗肿瘤的机制。方法：合成特异性靶向到肿瘤细胞表面表皮生长因子受体（EGFR）的近红外荧光分子对比剂EGF-Cy5.5,验证试剂合成的靶向特异性。口腔鳞状细胞癌A431细胞系暴露于浓度分别为0μM,0.5μM,2.5μM和5.0μM的三氧化二砷溶液中0,24 h,48 h和72 h。共聚焦显微镜、流式细胞仪及免疫组化证实EGFR的表达水平,上述实验均测量三次,结果取平均值。结果：EGF-Cy5.5靶向荧光对比剂的标记率为68%~70%。对比对照组,越高浓度的三氧化二砷处理的肿瘤细胞其获得的细胞荧光信号强度越小,这与药物浓度越高细胞表面表达EGFR的量越少相一致。流式细胞仪显示,在72小时,作用于细胞的三氧化二砷药物浓度分别为0.5μM,2.5μM,和5.0μM,其相对应获得的细胞EGFR表达量分别为57.28±3.2%（P〈0.05）,29.91±2.2%（P〈0.01）和10.73±2.4%（P〈0.01）,明显低于对照组的细胞EGFR表达量74.42±1.8%,（P〈0.05）。结论：本研究应用近红外荧光分子成像的方法体外检测口腔鳞状细胞癌A431的EGFR表达水平,实验证明三氧化二砷对其EGFR具有明显的抑制作用,且抑制作用具有时间-剂量依赖性。     

腺苷酸活化蛋白激酶发挥抗炎作用的分子机制

腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)是一种进化保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,被称为"细胞能量调节器",是维持细胞和机体能量平衡的关键分子。近年来的研究显示,AMPK与炎症反应密切相关,其抗炎机制主要是通过激活SIRT1、PGC-1α、p53、FoxO3a和p300等途径,下调NF-κB、AP-1等多种炎性相关蛋白的活性来发挥作用。本文通过对AMPK发挥抗炎作用的分子机制进行综述,为以AMPK为靶点治疗炎症及相关疾病提供参考。     

蔗糖-葡萄糖双功能酶传感器的研究

结合蔗糖转化酶(INV)酶管与葡萄糖氧化酶(GOD)-葡萄糖变旋酶(MUT)双酶电极构成一种新的蔗糖传感器。该传感器可以分别用于蔗糖及葡萄糖的测定。蔗糖经酶管作用产生α-D-葡萄糖,再用COD-MUT双酶电极定糖。若是样品中蔗糖和葡萄糖共存,比较样品流经不同路径(Ws和Wg)时传感器的响应值,可以排除葡萄糖对蔗糖测定的干扰。传感器的最适pH和温度范围分别为:5.0—6.5和30—40℃。在稳态法实验中,传感器的线性范围为:2.5×10~(-4)—5×10~(-3)mol/L。传感器的重复性很好,CV<1％。该传感器在用于测定发酵培养基(含葡萄糖)的蔗糖含量,平均回收率为97.9％。传感器与糖度计法测定的相关系数为0.997。传感器至少可以稳定使用8天以上。     

蔗糖酶在尼龙丝上的固定化及酶管性能研究

利用盐酸水解法处理尼龙丝表面,采用戊二醛交联法将蔗糖酶固定在尼龙丝上,制成酶丝,进而制成酶管.该酶管可用于蔗糖的测定,蔗糖通过酶管分解成葡萄糖,再用葡萄糖氧化酶(GOD)电极测糖.酶管的最适 pH 为5—6,最适温度范围:30—40℃.溶液的流速对酶管的转化效率有显著影响.流速为1.3ml/min 时,蔗糖浓度在0—5mmol/L 范围内,酶管的转化效率基本恒定,约为28.5%.用同一浓度的蔗糖溶液重复实验,酶管的重复性很好,CV＜1%。酶管活力至少稳定8d(天)以上.     

菜薹花药培养诱导胚状体的研究

分别以特早50、青梗菜心、9872和四九菜心(19)为供试材料,进行了基因型、温度、碳源等因素对菜心花药培养诱导胚状体影响的研究.结果 表明:不同基因型菜薹花药诱导率的差异显著,在改良B5固体培养基上特早50、9872、四九菜心(19)的诱导率依次降低,而青梗菜心诱导不出胚状体;不同温度的前处理对9872花药的诱导率也存在影响,其中以4℃低温1预处理幼花序1～2d和33℃(2温预培养24～48h的处理效果最佳;碳源对胚状体的诱导也有较大影响,其中蔗糖效果好于麦芽糖,且质量浓度为13%的蔗糖对特早50诱导率最高,而13%的麦芽糖诱导不出胚状体.