抗人活化血小板单抗SZ一51嵌合抗体的构建及表达

ＳＺ－５１是一种抗人活化血小板单克隆抗体,并显示了很好的导向血栓显像与导向溶栓性能。为了减少该单抗的免疫原性以及能获得高效表达的ＳＺ－５１“人源化”单抗,我们构建了真核表达载体ａ－Ｌｙｓ１７－５１ＶＫ／Ｈｕ．ａ－Ｌｙｓ３０－５１ＶＨ／Ｈｕ。应用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ方法分别将重、轻链表达载体导入骨髓瘤细胞ＳＰ２／０中,并在相应的选择性培养基中进行耐药克隆筛选,经过体外长期传代培养和二次单克隆化,获得了一株高效表达重组ＳＺ－５１嵌合抗体的细胞株。培养上清中抗体蛋白的表达量为５ｍｇ／Ｌ,经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实重组嵌合抗体具有与亲本鼠源单抗相同的ＧＭＰ－１４０结合特性,而且能与鼠源ＳＺ－５１单抗竞争结合活化血小板。本研究结果表明,基因工程“人源化”ＳＺ－５１单抗可以作为导向载体进行导向显像与导向溶栓,并为今后进一步应用于临床展示了良好的前景。     

基因敲除技术现状及应用

功能基因组学的研究进展使基因敲除技术显得尤为重要。基因敲除技术从载体构建到细胞的筛选到动物模型的建立各方面都得到了发展。其中Cre—LoxP系统可以有效的控制打靶的发育阶段和组织类型,实现特定基因在特定时间和（或）空间的功能研究;转座子系统易于操作,所需时间短,具有高通量的特点,可以携带多种抗性标记,方便了同时进行多基因功能研究;基因捕获技术提供了获得基因敲除小鼠的高效方法,方便了进行小鼠基因组文库的研究。此外,进退策略、双置换法、标记和交换法、重组酶介导的盒子交换法也从不同方向发展了基因敲除技术。     

烙铁头Trimeresurus Mucrosquamatus蛇毒对血小板的活化作用

烙铁头Trimeresurus Mucrosquamatus蛇毒(TMV)可引起人和多种动物(狗、家兔、豚鼠)血小板的活化,发生聚集。血小板聚集强度与加入TMV的量有关。豚鼠血小板对TMV最为敏感,TMV引起豚鼠、家兔、狗和人的血小板聚集的最低剂量分别为0.6、12.5、2.0、2.0μg/ml。EDTA抑制而肝素不影响TMV对血小板的聚集作用。TMV的血小板聚集反应伴有5羟色胺的释放,引起家兔血小板5羟色胺最大释放(72％)的TMV剂量为100μg/ml。TMV还可以诱导血小板血栓恶烷A_2的形成。阿斯匹林能阻断TMV诱导的血栓恶烷A_2的生成,但并不抑制TMV引起的血小板聚集反应,提示TMV可能通过不依赖于血栓恶烷A_2的途径活化。初步结果表明TMV是研究血小板生理机制的有用工具。     

piwi基因在宫颈癌组织中的表达

目的本研究旨在探讨piwill、piwil3和piwil4在宫颈癌组织与宫颈正常组织中的差异性表达,为进一步确定其在肿瘤发生发展中的作用奠定基础。方法根据已知的3条基因序列设计合成3对特异性引物,利用RTPCR检测9对宫颈癌组织及癌旁正常组织的piwill、piwil3和piwil4 mRNA水平,并以β-actin基因为标准进行对比。结果宫颈癌组织piwill、piwil3和piwil4的表达水平明显高于正常组织。结论piwill、piwil3和piwil4在宫颈癌中的表达提示其可能参与了宫颈癌的发生发展过程。     

AFP的亚细胞定位及对肿瘤细胞生长的影响

目的观察甲胎蛋白（AFP）在不同肿瘤细胞中的亚细胞定位及对肿瘤细胞生长的影响。方法运用免疫荧光的方法观察内源性AFP在HeI。a细胞、QGY-7703细胞、MCF-7细胞中的亚细胞定位。将构建的表达AFP的质粒pcDNA3-AFP及AFP腺病毒siRNA干涉载体Adv—AFPsiRNA作用于QGY-7703细胞,MCF-7细胞,运用M1Tr,集落形成实验检测细胞增殖状况。结果免疫荧光显示,内源性的AFP在HeLa细胞、QGY-7703细胞、MCF-7细胞均只在细胞质中表达。pcDNA3-AFP使QGY-7703的细胞活性增加了2l％（P〈0．05）及集落形成能力增加了32％（P〈0．01）,MCF-7实验组比对照组细胞活性降低了30％（P〈0．01）．克隆形成能力降低82％（P〈0．01）。Adv—AFPsiRNA使QGY-7703的细胞活性降低了22％（P〈0．05）,平均克隆形成能力降低52％（P〈0．01）,MCF-7细胞活性提高了24．5％（P〈0．05）,克隆形成能力提高了89％（P〈O．01）。结论内源性的AFP只在细胞质中表达。AFP能促进QGY-7703细胞的增殖及克隆形成能力,而在MCF-7细胞中发挥相反的作用。腺病毒介导的内源性的AFP表达的下调能降低QGY-7703的增殖,却增加了MCF-7的细胞活性及克隆形成能力。     

抗人活化血小板单克隆抗体SZ—51可变区基因的克隆与序列分析

抗人活化血小板单克隆抗体ＳＺ—５１可变区基因的克隆与序列分析顾建明,张效民,万海英,李佩霞,Ｍ．Ｐ．ＬＥＦＲＡＮＣ阮长耿（江苏省血液研究所,苏州医学院血栓与止血研究室,２１５００７）法国Ｍｏｎｔｐｅｌｌｉｅｒ分子遗传研究所关键词单克隆抗体,免疫球蛋白...